艾曲波帕/瑞弗兰损害尤因肉瘤细胞中的DNA复制

　　在以前的工作中，我们确定核糖核苷酸还原酶（RNR）的铁依赖性RRM2亚基是脱氧核糖核苷酸合成中的限速和铁依赖性酶，并且是DNA复制所必需的，是尤因肉瘤中铁螯合剂的目标之一细胞。RNR的抑制是已知的，以耗尽脱氧核糖核苷酸，IMPAIR DNA复制，导致DNA复制应力，并激活共济失调毛细血管扩张症和RAD3相关蛋白（ATR）检控点激酶1（CHK1）DNA损伤应答途径。如使用EdU掺入试验评估，艾曲波帕（瑞弗兰）会损害Ewing肉瘤细胞系中的DNA复制。接下来，我们生成了表达“ PIP-FUCCI”荧光报告系统的EW8尤因肉瘤细胞系，该系统使用荧光标记蛋白鉴定活细胞中的细胞周期阶段。显示艾曲波帕显着增加了S期的细胞数量，这与DNA复制受损有关。

　　DNA复制应力，由于抑制RRM2或其他原因，产生的DNA损伤并激活CHK1 DNA损伤应答途径。因此，我们用治疗艾曲波帕尤文肉瘤细胞系中，标记的细胞用EdU识别S期细胞中，然后染色的细胞DNA损伤的γH2AX标记。交流表明艾曲波帕在S期细胞（EdU阳性细胞）中引起DNA损伤。此外，如通过Ser345处CHK1的磷酸化所评估的那样，艾曲波帕处理还激活了尤因肉瘤细胞中的ATR-CHK1 DNA损伤应答途径。用半胱天冬酶抑制剂Z-VAD-FMK处理细胞未阻断由艾曲波帕引起的磷酸化H2AX，这表明DNA损伤并非继发于细胞凋亡。

　　SLFN11在尤因肉瘤肿瘤过度表达的，并且已知其使细胞对一定范围的药物引起DNA复制应力，包括铁螯合剂。因此，我们使用CRISPR / Cas9敲除了两个Ewing肉瘤细胞系A673和TC71中的SLFN11。作为对照，我们首先用吉西他滨处理了SLFN11基因敲除和亲代细胞，吉西他滨是抑制RNR的RRM1亚基并引起DNA复制压力的药物。还报道了SLFN11介导细胞对吉西他滨的敏感性。

　　根据IC50测量，SLFN11的敲除使Ewing肉瘤细胞对吉西他滨的敏感性降低了2倍。类似地，SLFN11敲除细胞系对艾曲波帕的抗性也比亲代细胞系高约2倍。接下来，我们使用强力霉素诱导系统在正常表达SLFN11的纤维肉瘤细胞系HT1080中表达SLFN11。数字显示在HT1080细胞中SLFN11的表达使细胞对艾曲波帕的敏感性增加了1.8倍。总的来说，这些结果表明，SLFN11的高电平在尤文肉瘤细胞中表达的介导小号，部分地艾曲波帕增强灵敏度。现在艾曲波帕价格是多少？更多详情可咨询下方微信。