奥希替尼对egfr突变的NCLC细胞系的影响

　　奥希替尼对egfr突变的NCLC细胞系的影响。

　　在我们的NCLC细胞系中，我们选择了在19外显子突变中存在EGFRE746-A750缺失的HCC827和两个EGFRT790M阳性模型H1975(EGFRL858R，T790M)和PC9T790M(EGFR外显子19-E746-A750缺失，T790M)细胞作为假设的临床场景的代表。特别是我们考虑病人的模型HCC827代表窝藏最常见的激活突变表皮生长因子受体(即E746-A759del和L858R)已知的第一代EGFR-TKIs非常敏感，和H1975PC9T790M模型内在和获得性耐药第一代EGFR-TKIs。

　　治疗剂量反应曲线与吉非替尼H1975和PC9T90M细胞，afatinib和奥希替尼afatinibIC50值1μM的细胞系和奥希替尼H19750.1μM和0.01μMPC9T790M通过MTT试验和证实耐吉非替尼IC50>5μM；相反，HCC827细胞对所有三种EGFR-TKIs都非常敏感(IC50值在0.01和0.05的hfr-tkisM之间)。H1975和PC9T790M细胞在体外表现出显著的侵袭性、迁移性和不依赖于固定物的殖民地生长能力，被奥希替尼强烈抑制至50%和25%，而根据体外校正，HCC827没有显著的迁移性和侵袭性(数据未显示)。

　　奥希替尼一线治疗egfr突变NCLC异种移植的疗效观察。

　　将HCC827、H1975和PC9T790MNCLC细胞皮下注射至裸鼠背侧，2周后，当肿瘤大小约为200mm3时，每组20只小鼠分别接受奥希替尼治疗。在所有的模型中，奥希替尼的治疗在生长抑制方面显示了很强的抗肿瘤作用。特别是，在HCC827、H1975和PC9T790M异种移植中，奥希替尼治疗在4周时达到了100%的应答率(RR)，每组20只小鼠中有20只出现PR。所有组的中位反应时间(TTR)为3周，治疗持续到病情进展(PD1)，中位DoT在h1975-组为17周，pc9t790m组为18周；在HCC827异种移植中，DoT不能计算，因为20只小鼠中只有8只发生了PD。18周后，HCC827组的RR为60%(20人中有12人有CR，20人中有8人有PD)，H1975组为40%(20人中有CR，20人中有PD)，PC9T790M移植组为50%(20人中有10人有CR，20人中有10人有PD)；反应持续到实验结束，固定为52周，没有任何复发的迹象。

　　20例HCC827中有8例，20例H1975中有12例，20例PC9T790M奥希替尼耐药肿瘤中有1例是在PD检测时开始二线治疗的候选肿瘤。治疗耐受性良好，无体重减轻或其他急性或迟发性毒性症状(数据未显示)。

　　索鲁美替尼或西妥昔单抗二线治疗对奥希替尼耐药的非小细胞肺癌异种移植的影响。

　　八HCC82712H1975，10PC9T790M奥希替尼-resistant异种移植被随机分为两组(每组4老鼠为HCC827异种移植，小鼠每组H1975异种移植，和每组5老鼠PC9T790M异种移植)，除了持续奥希替尼治疗，selumetinib或西妥昔单抗。在所有团体、组合诱导显著的肿瘤收缩在所有的肿瘤，100%的RR后4周。14周后，RR75%HCC827奥希替尼-resistant异种移植治疗奥希替尼+selumetinib(14PD和4CR)和50%奥希替尼+西妥昔单抗arm(4PD和24CR)。在H1975奥希替尼耐药组，两组的RR为66.6%(6人中有2人有PD，6人中有4人有CR)。在PC9T790M异种移植中，osimerinib+selumetinib组的RR为60%(5人中2人有PD，5人中3人有CR)，osimerinib+西妥昔单抗组的RR为80%(5人中1人有PD，5人中4人有CR)。所有反应持续了固定观察时间52周，从开始一线治疗。与一线治疗相似，治疗一直持续到PD的发展。在任何异种移植组中均未达到中位点。两种联合治疗的耐受性都很好，没有显著的体重减轻或其他毒性反应(数据未显示)。

　　一线治疗奥希替尼+Selumetinib或西妥昔单抗在egfr突变的非小细胞肺癌异种移植中的抗肿瘤疗效。

　　与之前的治疗组相似，HCC827、H1975和PC9T790MNCLC异种移植小鼠(20/组)被随机分配给奥希替尼+西鲁美替尼或西妥昔单抗。

　　三种模型的所有组合在治疗3周时的RR均达到100%，所有小鼠PR维持到第8周。在30周，H1975奥希替尼-plus-selumetinib异种移植的手臂，RR为80%(810的CR和2的PD)，而在奥希替尼-plus-cetuximab手臂，RR为90%(810CR，110公关，和101PD)。在PC9T790M和HCC827异种移植物中，在相同的治疗时间点，我们检测到两组患者的RR为90%，在每组治疗中只有1/10的患者有PD。因此，大多数小鼠表现出CR是一线联合治疗的最佳反应，奥希替尼+selumetinib组为86.67%(30例中有26例)，奥希替尼+西妥昔单抗组为90%(30例中有27例)，并在整个实验期间(固定为52周)保持了这些反应。在对小鼠进行程序化牺牲之前，没有记录到明显的毒性反应(数据未显示出来)。

　　在egfr突变的非小细胞肺癌异种移植中，序贯与一线用药奥希替尼联合西鲁美替尼或西妥昔单抗对比分析PFS。

　　我们根据Kaplan-Meier法对PFS进行统计分析，比较两种设计的治疗策略的结果。三组联合一线治疗在PFS与奥希替尼方面均有统计学优势。奥希替尼组的中位PFS(mPFS)在H1975-17周(95%可信区间：14.01-19.9，p=0.001)，PC9T790M-18周(95%可信区间：未达到，p=0.003)，在hcc827-异种移植中未达到。在联合组中，三组均未达到mPFS。二线治疗奥希替尼+selumetinib或西妥昔单抗抗奥希替尼异种移植无统计学差异(数据未显示)，两组均未达到mPFS。经PD至二线治疗的HCC827、H1975和PC9T790M异种移植小鼠的mPFS分别为29周、27.5周和28周。

　　egfr突变的NCLC异种移植对一线奥希替尼和联合西妥昔单抗或西罗美替尼一线或二线治疗耐药的分子机制分析。

　　对临床PD1时对奥希替尼耐药的异种移植物的细针穿刺细胞学标本，以及在二线或一线治疗后联合使用奥希替尼+西鲁美替尼/西妥昔单抗治疗的异种移植物的肿瘤标本进行NGS。

　　作为对照，我们使用了HCC827、H1975和PC9T790M细胞，这些细胞均未经过任何类型的处理。没有新的突变被发现在抗肿瘤、肠外细胞系相比，只有一个显著减少检测到已知的表皮生长因子受体突变的等位基因频率。这些数据证实，完整的药物抑制EGFR通路产生了强烈的负面EGFR-positive选择性压力积累和青睐EGFR-independent积累色素的发展，提示有必要研究EGFR耐药机制的替代途径。

　　考虑我们之前的角色数据刺猬在EGFR抑制多个模型，我们研究了两个特定刺猬蛋白的蛋白质含量，SMOGli1，从肿瘤样本提取来自H19758*奥希替尼+selumetinibPC9T790M2*奥希替尼+selumetinib-resistant肿瘤免疫印迹分析，我们发现它们增加HCC827和PC9细胞相比，从我们之前的data15和它们各自亲本细胞系(H1975和PC9T790M细胞)中得知，这是hedgehog通路激活的阴性对照。在耐药肿瘤中，p-MAPK水平同样较高，且MAPK总蛋白水平在所有样本中无显著差异。在这两种细胞模型中，MET、AXL、IGF-1-R和HER2蛋白水平均未显著升高(数据未显示)。

　　为了确定在体外建立的两种对奥希替尼+selumetinib一线耐药肿瘤细胞培养(H19758*和PC9T790M2*)中hedgehog通路是否有功能激活，我们使用了荧光素酶检测。荧光素酶检测显示增加Gli-responsive推广活动来增加6-9倍H1975细胞和H19758*奥希替尼+selumetinib-R，分别增加了4倍增加PC9T790MPC9T790M细胞和8倍2*奥希替尼+selumetinib-R，比较之间的中等水平PC9HCC827细胞。正如我们之前在t790m阴性模型中所显示的，在egfr耐药的NCLC中，Hedgehog基因的激活是上皮细胞向间充质细胞转变的耐药机制之一。

　　因此，我们研究了通过使用选择性SMO抑制剂sonidegib或vismodegib，hedgehog抑制是否会影响细胞增殖、迁移和侵袭性。MTT检测是在sonidegib(0.1~0.51mol/l)作为单一药物或与selumetinib和奥希替尼联合使用的情况下进行的。selumetinib和奥希替尼作为单药和联合用药，细胞完全难治，在体内实验中证实了耐药性(数据未显示)。sonidegib与奥希替尼和selumetinib的三联组合显著影响了20%的细胞存活率和迁移和侵袭性，恢复了EGFR的敏感性。vismodegib也得到了类似的结果(数据未显示)。奥希替尼哪里购买？患者可以找医疗机构购买吗？比如康安途海外医疗。详情请扫码咨询：