卡博替尼的耐药性分析

　　卡博替尼的耐药性分析，为了确定耐药机制除了ntrk1的耐药突变，如旁路激活，我们将km12细胞暴露于1mol/l的卡博替尼。卡博替尼治疗1周后，仍有少量km12细胞残留。然后在卡博替尼存在下筛选和克隆能够存活的耐药细胞，建立卡博替尼耐药单克隆细胞。所有抗病无性系对卡博替尼的敏感性相当，ic50值增加了10倍以上。我们获得的20多个克隆，都没有ntrk1激酶结构域的突变。 我们主要用抗卡博替尼的克隆20(cr20)进行以下试验。

　　与enu诱变筛选获得的突变体不同的是，与亲本km12细胞相同浓度的cabozantinib、entretinib 或loxo-101对cr20细胞的ntrk1磷酸化有抑制作用。但是，cr20和cr4细胞的下游akt磷酸化仍然保持，即使用1mol/l的卡博替尼(cabozantinib)处理也是如此。Cr20和其他cr克隆也表现出对ntrk1抑制剂 ninetdanib、foretinib、entretinib和loxo-101的交叉抗性。我们假设有一个替代的旁路通路，负责阻力，因此我们进行磷酸化rtk阵列，以确定其他活跃的rtks。我们检测到在卡博替尼治疗的cr20细胞中，igf1r和ephrin受体b3的磷酸化水平较高。

　　卡博替尼的耐药性分析，同样的信号显示磷酸化的rtks也检测了cabozantinib处理的cr4细胞。为了确定这两种rtks是否诱导耐药，我们分别用1mol/l的达沙替尼(一种 bcr-abl 抑制剂，同时对ephb3有活性)或 aew541(一种igf1r 抑制剂)与卡博替尼联合处理细胞。我们还进行了集中药物筛选，联合卡博替尼、igf1r抑制剂 aew541、mek抑制剂azd6244或alk和igf1r抑制剂ceritinib，有效地对cr20细胞进行了卡博替尼敏感化。Aew541和cabozantinib，ninetdanib，foretinib，entretinib，或loxo-101联合处理能够逆转cr20细胞的抗性。用卡博替尼和aew541联合处理cr4细胞，观察到类似的结果。

　　然后，我们用特异性的igf1r抑制剂osi906证实了这一效应，并比较了km12亲本细胞和cr20细胞对ntrk-tkis和osi906共处理的敏感性。结果表明: 当cabozantinib与300nmol/losi906联合应用时，km12亲本细胞ic50由25.7nmol/l略降至12.2nmol/l，cr20细胞ic50由1910提高至37.3nmol/l，克服了抗药性。与km12亲代细胞相比，cr20细胞具有较高的磷酸化-igf1r和总igf1r水平，虽然单独使用卡博替尼不能抑制igf1r或下游信号通路，但卡博替尼与igf1r抑制剂联合使用可抑制igf1r的磷酸化和下游磷酸化。值得注意的是azd3463被报道为alk和igf1r的双重抑制剂，也能抑制ntrk1。实际上，azd3463单药治疗抑制了ntrk1和igf1r磷酸化及其下游信号转导 ，而azd3463在km12亲本细胞和cabozantinib 耐药 cr20细胞中表现出相似的 ic50。

　　因为抗卡博替尼的克隆被认为来自于高剂量(1mol/l)卡博替尼处理1周后存活的持久性克隆，我们检测了km12亲本细胞中是否存在持久性克隆，以及与 igf1r抑制剂联合处理是否可以消除这些持久性克隆。根据软琼脂试验结果，单用osi906或二甲基亚砜(dmso)处理7天后，亲本km12细胞形成大量集落。持久抗性克隆的存活率在卡博替尼(cabozantinib)、恩替尼(entretinib)或loxo-101(loxo-101)处理14天后得到显着提高，但在卡博替尼(cabozantinib)、恩替尼(enttinib)或 loxo-101(loxo-101)与 osi906的联合处理下，这些细胞的存活率明显降低。为了了解持久耐药克隆是如何产生的，我们随后使用限制稀释法获得的克隆5(wt-5) ，即km12细胞，进行了完全相同的操作。野生型野生型克隆的敏感性与亲本细胞及其它敏感性克隆相当。与亲代km12细胞的存在相似，用卡博替尼处理后的集落形成实验证实存在persister细胞，用卡博替尼和osi-906联合处理后的persister 细胞也被清除。卡博替尼哪里买多少钱？千万不要找代购买，买到假药就损失惨重了。详情请扫码咨询：