为了确定卡博替尼（cabozantinib）诱导的肿瘤清除是否通过增加T细胞和/或自然杀伤（NK）细胞向肿瘤床的浸润而发生，我们对卡波替尼治疗24小时的小鼠的前列腺肿瘤进行了qRT-PCR。有趣的是，我们观察到卡博替尼治疗后CD3，CD4，CD8（T细胞标记）或NKG2D（NK和活化的CD8 T细胞标记）的基因表达没有增加。如果肿瘤内驻留的NK和T细胞在抗肿瘤免疫反应中起主要作用，则单独和/或联合去除这些细胞类型应减弱卡博替尼对肿瘤清除的作用。为了检验这个假设，Pb-Cre;PTENfl / fl/ p53fl / fl分别用针对CD4 / CD8和抗唾液酸GM1的抗体对小鼠进行预处理，以分别消耗常规T细胞亚群和NK细胞，然后共同施用卡博替尼。我们发现CD4 / CD8或NK耗竭抗体均未单独或组合减弱由卡博替尼引起的肿瘤清除率，表明其抗肿瘤免疫机制与常规T细胞和NK细胞均无关。
卡博替尼治疗后48小时内嗜中性粒细胞浸润到肿瘤床中，这表明嗜中性粒细胞效应子功能可能在肿瘤清除中起作用。如果通过卡博替尼引发的肿瘤间隙由中性粒细胞浸润介导的，则该反应应该由伴随粒耗尽或趋化封锁与地塞米松或CXCR4抑制剂，普乐沙福或HMGB1中和。另一方面，如果卡博替尼的抗肿瘤作用是通过肿瘤内抑制促肿瘤的CD11b+/ GR1+介导的粒细胞MDSC，然后卡博替尼诱导的肿瘤清除率应不受Ly6G+粒细胞耗竭或粒细胞趋化性阻断的影响。为了测试这些可能性，携带Pb-Cre的肿瘤；PTENfl / fl/ p53fl / fl小鼠用抗Ly6G耗尽抗体（1A8）或CXCR4抑制剂plerixafor预处理，然后分别伴随1A8或plerixafor和卡博替尼预处理。此外，我们还评估了HMGB1中和（3E8）对卡博替尼引起的肿瘤清除的影响。相对于单独的卡博替尼，与1A8抗体/卡博替尼治疗，普乐沙福/卡博替尼和3E8 /卡博替尼治疗的组合治疗均导致肿瘤床内颗粒细胞标记Ly6G和中性粒细胞特异性标记MPO的表达完全丧失，这表明不存在卡博替尼。肿瘤浸润性中性粒细胞。至关重要的是，仅用卡博替尼观察到的caspase-3染色增加和肿瘤几乎完全根除被1A8抗体/卡博替尼（cabozantinib）取消。
这证明了肿瘤浸润性中性粒细胞在卡博替尼诱导的肿瘤清除中的必要作用。此外，中性粒细胞浸润程度之间存在直接相关性和不同治疗组的肿瘤caspase-3染色。长期使用普乐替卡/卡博替尼和3E8 /卡博替尼治疗的小鼠会干扰卡博替尼诱导肿瘤消退的能力，在联合治疗2周结束时肿瘤的组织病理学持久性。另外，卡博替尼引起的这种由中性粒细胞介导的肿瘤清除也被地塞米松减弱，已知地塞米松抑制中性粒细胞的趋化性。综上所述，这些数据表明卡博替尼通过激活依赖HMGB1和CXCR4的中性粒细胞介导的抗肿瘤先天免疫应答，消除了鼠类浸润性PTEN / p53缺陷型前列腺癌。
如果可溶性肿瘤分泌因子负责体内中性粒细胞趋化性和PTEN / p53缺陷型肿瘤的活化，那么用卡博替尼离体处理肿瘤细胞应增强中性粒细胞的效应子功能。为了验证这一假设，我们分别在跨孔迁移和一氧化氮（NO）释放试验中对人类嗜中性白细胞进行了趋化性和激活作用。与我们的体内发现一致，我们发现卡博替尼治疗Transwell下部腔室中的PC3人前列腺癌细胞导致嗜中性白细胞从上部腔室迁移的增加> 3倍，并且在共培养的中性粒细胞中，一氧化氮（NO）染色使中性粒细胞增加20％。在没有肿瘤细胞的情况下，卡博替尼治疗不会增强中性粒细胞迁移或增加NO染色，这表明增加的迁移/激活是通过肿瘤分泌因子而不是通过卡博替尼对中性粒细胞本身的直接作用来实现的。此外，伴随的HMGB1耗竭（3E8）抗体完全消除了卡博替尼引起的嗜中性粒细胞趋化性增强。
综上所述，这些数据证实了卡博替尼介导的HMGB1从肿瘤细胞释放的关键作用，导致嗜中性粒细胞趋化性和激活性增强。肿瘤微环境中肿瘤炎症/免疫趋化因子网络的这种重新编程触发了强大的中性粒细胞浸润和根除浸润性癌症。微信扫描下方二维码了解更多：
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