达拉非尼dabrafenib对细胞周期和诱导凋亡的影响

　　达拉非尼(dabrafenib)在3天的增殖试验中检测了其抑制195株肿瘤细胞株生长的能力。编码BRAFV600E的20株细胞系中，有16株(80%)对达拉非尼(dabrafenib)敏感(gIC50<200nM)。另外5株突变株中有3株对dabrafenib敏感(gIC50<30nM)，分别为WM-115(BRAFV600D)和YUMAC(BRAFV600K)。然而，在152株RAS/RAF野生型和全部18株突变型RAS细胞株中，有133株(88%)对dabrafenib(gIC50>10μM)不敏感，显示出对激活的突变型BRAF细胞株的生长抑制具有高选择性。　

　　以编码BRAFv600e(A375P,SK-MEL-28)或野生型BRAF(HFF)的细胞株为研究对象，分析达拉非尼(dabrafenib)对细胞周期和诱导凋亡的影响。当Dabrafenib浓度达到10μM时，野生型BRAF细胞未受影响。虽然不同细胞系的细胞凋亡水平不同，但达拉非尼(dabrafenib)在这些BRAFV600E细胞中持续诱导caspase-3/7激活和凋亡。　　

　　在小鼠BRAFV600E(A375P)人肿瘤异种移植模型中检测达拉非尼(dabrafenib)的体内活性。小鼠每天口服一次，剂量为30mg/kg，连续14天，肿瘤在治疗期间和停止治疗后均进行测量。分别在第1天、第7天和第14天采集肿瘤和血液进行pERK抑制和达拉非尼(dabrafenib)浓度测定。达拉非尼(dabrafenib)是口服生物利用的，多次给药后不会显著累积，并导致pERK下降，并在给药7天和14天后持续18小时。最终剂量后6小时的肿瘤通过免疫组织化学染色，检测细胞增殖标志物(Ki67)、生长抑制标志物(p27)和MAPK信号传导标志物(pERK)。　　

　　结果支持了达拉非尼(dabrafenib)对细胞生长的靶向抑制机制，该机制导致pERK和Ki67分别下调89%和28%，p27上调54%。这些肿瘤生长标记物水平的变化转化为疗效，在BRAFV600E(Colo205)人类肿瘤异种移植模型中，经过14天的治疗后，达拉非尼(dabrafenib)显示出剂量依赖性的肿瘤生长抑制作用，8只小鼠中有4只在100mg/kg剂量下显示部分退化。　　

　　在14天给药期结束时，与对照相比，达拉非尼(dabrafenib)对肿瘤生长的抑制效果显著，当达拉非尼(dabrafenib)剂量为10、30和100mg/kg时，p值分别为0.007、0.00009和0.000005。用205年科罗拉多州模型演示活动在另一个BRAFV600E细胞/肿瘤类型(结肠癌),而相似的结果也出现在A375P肿瘤异种移植模型4完整和2部分回归100毫克/公斤,完成1和2部分回归10毫克/公斤8组的老鼠。　　

　　在这两个病例中，14天后停止药物治疗导致肿瘤生长，这表明需要慢性治疗以获得最大的临床效益。详情请扫码咨询：