曲美替尼Trametinib耐药研究

　　在黑色素瘤中，TYRP1mRNA具有潜在的非编码作用，可以作为海绵隔离肿瘤抑制miRs。据我们所知，没有关于靶向治疗产生耐药性后黑色素瘤中TYRP1表达变化的报道。我们使用患者来源的drug-naïveRASQ61R和BRAFV600E黑色素瘤细胞系。在BRAFV600E黑色素瘤细胞中，对vemurafenib和曲美替尼（Trametinib）产生了耐药性。用延时荧光显微镜观察细胞增殖情况，用qRT-PCR和Westernblotting检测TYRP1的表达以及MITF-M的水平和活性。在RASQ61R细胞中，TYRP1蛋白的高水平对应着TYRP1mRNA的高水平，而在BRAFV600E细胞中，检测不到的TYRP1蛋白则伴随着中等水平的mRNA，在携带NF1R135W变异的细胞中也是如此。TYRP1的表达与mitf-m无关，因为在MITF-Mhigh和MITF-Mlow细胞中发现了类似的转录状态。　　

　　我们首次表明，在对vemurafenib或曲美替尼（Trametinib）产生耐药性的黑色素瘤细胞中，包括那些失去MITF-M的细胞中，TYRP1的表达仍然没有改变。同样，在耐药细胞中停药对TYRP1的表达也没有实质上的影响。为了验证体外结果，对公开的微阵列数据进行了分析。在治疗前和复发后的大多数配对黑色素瘤患者样本中，由于靶向治疗的耐药性，TYRP1转录水平保持不变。由于在对vemurafenib或曲美替尼（Trametinib）耐药性发展过程中，黑色素瘤细胞中的TYRP1mRNA水平仍然没有改变，终止TYRP1转录海绵活性的疗法可能扩展到耐药疾病复发的患者。　　

　　黑素瘤是最致命的皮肤癌。决定黑色素瘤风险的重要因素之一是表皮黑色素含量。TYRP1(酪氨酸酶相关蛋白)和另外两种酶，酪氨酸酶和TYRP2，在黑色素的产生中是活跃的。TYRP1是黑素细胞分化的标志，但它也参与了氧化应激下的生存反应。侵袭性黑素瘤中TYRP1蛋白表达降低，中TYRP1mRNA表达升高。除了蛋白编码功能外，TYRP1mRNA还被认为是内源性miR海绵，参与基因表达调控。　　

　　在黑素细胞中，包括TYRP1在内的约100个基因的表达依赖于小眼相关转录因子(MITF)。MITF的M亚型(MITF-M)是影响黑色素瘤表型的主要因素之一。其调控是复杂的，涉及微环境成分。MITF-M高水平与分化有关，中等水平与增殖有关，而低水平则与侵袭性和茎样表型相关。MITF-M也在黑素瘤细胞[21]中发挥促生存作用。急性暴露于vemurafenib后，BRAFV600E黑色素瘤细胞中MITF水平增强，而MITF抑制增加了细胞对该抑制剂[1]的敏感性。相反，在vemurafenib耐药的黑色素瘤中，MITF水平和几个MITF依赖基因的表达显著降低，导致黑色素瘤细胞更原始表型。近来，不仅vemurafenib耐药细胞系中，而且大部分曲美替尼（Trametinib）耐药细胞系中，MITF表达减少，MITF依赖的色素沉着程序被抑制。　　

　　因此，我们发现在耐药发展过程中TYRP1转录水平与MITF水平的关系及其活性的变化表现为其他MITF依赖基因SLC45A2、BIRC7/livin和BCL2A1转录水平的变化是很有趣的。SLC45A2(溶质载体家族45)和TYRP1属于色素相关基因，而BIRC7(含杆状病毒IAP重复‐7)和BCL2A1(bcl2相关蛋白A1)编码生存前蛋白。我们认为耐药过程中MITF-M水平的降低将伴随MITF-M依赖基因表达的降低。问题是TYRP1mRNA是否也会减少。这个答案很重要，因为TYRP1转录本水平的降低可能限制了它在耐药细胞中作为miR海绵的功能。我们在drug-naïveMITF-Mhigh和MITF-Mlow患者来源的黑色素瘤细胞系及其vemurafenib或曲美替尼（Trametinib）耐药的同行中进行了我们的研究，也受到了停药(“药物假期”)。详情请扫码咨询：