达拉非尼(Tafinlar)耐药细胞

　　研究分析了对达拉非尼（Tafinlar）具有获得性耐药性的两种细胞系，即A375R和SK-Mel28R。就其匹配的药物敏感性对应物而言，两种细胞系均显示出增加的侵袭性并分泌更高量的VEGF-A和MMP-9。另一方面，他们对达拉非尼的短期暴露有不同的反应，后者诱导了A375R细胞中VEGF-A和MMP-9分泌的进一步增加以及ECM的侵袭，而对SK-Mel28R中的这些细胞过程没有影响细胞。值得注意的是，SK-Mel28R细胞中VEGF-A和MMP-9分泌的基础水平分别比A375R细胞中检测到的基础水平高约5倍和2倍。此外，我们先前已经证明，在A375R细胞中，达拉非尼诱导的ECM侵袭刺激取决于药物介导的VEGF-A分泌的上调。SK-Mel28R细胞自身产生的大量VEGF-A和MMP-9可以解释为什么当细胞暴露于达拉非尼时这些细胞因子的释放没有增加，以及为什么任何一种外源均未诱导进一步刺激ECM入侵VEGF-A或达拉非尼治疗。

　　A375R和SK-Mel28R细胞侵袭性的增加似乎并不依赖于PTTG1表达的上调，因为这两种细胞系均以与其匹配的药物敏感性类似物相当的水平表达PTTG1。然而，通过PTTG1敲低，A375R和SK-mel28R细胞的侵袭能力明显降低。此外，尽管达拉非尼仍可刺激PTTG1的侵袭性-沉默的A375R细胞，与药物治疗的PTTG1表达细胞相比，这些细胞对ECM的侵袭显着降低。在临床环境中，对BRAFi产生抗药性的黑素瘤患者经常继续治疗，直至病情恶化。实际上，已经证明，延长BRAFi治疗超出RECIST疾病进展可提供临床益处。我们的研究结果表明，靶向PTTG1联合达拉非尼治疗可提供更好的疾病控制，因为PTTG1表达受损能够减少细胞增殖，抑制与达拉非尼获得性耐药相关的高侵袭性行为并抵消该药物可能的刺激作用对黑色素瘤细胞的转移潜力。在这方面，我们的数据显示，以4μM的浓度使用CDK4 / 6抑制剂LEE011进行治疗。值得注意的是，暴露于4μMLEE011可以显着抑制A375R细胞的增殖，当CDK4 / 6抑制剂与达拉非尼联合使用时，这种抑制作用也得以维持。此外，尽管4μMLEE011不会影响A375R的基础侵袭性，但它消除了由达拉非尼诱导的该细胞系对ECM侵袭的刺激。

　　当以16μM的浓度使用该药物时，LEE011对A375R细胞增殖和侵袭性的影响更加明显，从而消除了PTTG1的表达。实际上，16μMLEE011不仅在减少A375R细胞增殖方面比4μMLEE011更有效，而且显着抑制了这些细胞的基础侵袭性。此外，尽管用达布拉非尼加16μMLEE011处理的A375R细胞的侵袭能力高于仅用CDK4 / 6抑制剂处理的细胞所表现出的侵袭能力，但仍低于DMSO处理的细胞。这些结果表明，由LEE011诱导的PTTG1表达的抑制部分地导致了药物诱导的细胞增殖和侵袭性损伤。因此，在对照和对照中观察到相当程度的细胞生长减少和ECM侵袭。用16μMLEE011处理后，PTTG1沉默的A375R细胞。

　　由于细胞周期蛋白D-CDK4 / 6-p16INK4A-Rb途径的改变经常发生在各种类型的肿瘤（包括大多数黑素瘤）中，因此CDK4 / 6抑制剂是有望用于癌症治疗的候选药物，并促进持续增长。实际上，palbociclib和LEE011已被FDA批准用于乳腺癌治疗。此外，这两种药物和其他CDK4 / 6抑制剂作为单一药物或在多种肿瘤的联合治疗中正在临床研究中。

　　虽然CDK4 / 6抑制剂既可以减少黑色素瘤细胞生长的体外和动物模型中，这些药物的效果似乎主要抑制细胞生长。因此，单用CDK4 / 6抑制剂的治疗不被认为是黑色素瘤的有效治疗方式。在另一方面，已经显示在黑色素瘤细胞[CDK4 / 6的伴随抑制和MAPK途径的协同或相加的抗增殖作用。此外，Yadav等证明CDK4 / 6抑制剂LY2835219在体外和体内抑制方面都非常有效，具有对BRAFi vemurafenib产生抗性的黑色素瘤细胞的生长。我们的结果与以前的发现一致。此外，他们证明CDK4 / 6抑制剂还可以降低BRAFi耐药细胞的侵袭性，并抵消BRAFi对这些细胞侵袭能力的可能刺激作用，从而为MAPK途径抑制剂与药物选择性结合的治疗策略提供进一步的实验支持。定位到CDK4 / 6。

　　在本研究中，我们还研究了达拉非尼耐药细胞中MMP-9分泌的下调是否可能与PTTG1敲低引起的ECM侵袭受损有关。实际上，MMP-9在黑素瘤侵袭重要作用和PTTG1已经显示出正性调节MMP-9的表达水平。

　　我们的数据强烈支持MMP-9下调参与PTTG1沉默对达拉非尼（Tafinlar）耐药细胞侵袭性的影响。确实，在暴露于DMSO或达布拉非尼之前，A375R细胞中的PTTG1敲低显着降低了MMP-9的分泌。此外，当在抗MMP-9 mAb的存在下进行测定时，结果抑制了对照细胞和药物处理细胞的侵袭能力。最后，在DMSO和达拉非尼处理的细胞中，PTTG1沉默，MMP-9抑制作用或它们的组合均可诱导相当水平的ECM入侵抑制作用。微信扫描下方二维码了解更多：