达克替尼/多泽润相比于拉帕替尼可破坏膜定位

　　与拉帕替尼不同，达克替尼（多泽润）可破坏膜定位，降低CRPC细胞中EGFR家族成员的EGFR-HER2二聚化和下游信号传导。在22Rv1细胞中，下拉测定法证明了带有达克替尼的EGFR-HER2二聚体显着消失，而在较小程度上是HER2-ErbB3二聚体。将细胞在DMSO，2 μM 拉帕替尼或2 μM 达克替尼的存在下培养72小时，在该阶段结束时，将其用PBS，10 ng / ml EGF或50 ng / ml HRG进一步处理30分钟。

　　请注意，在这些细胞中，除了在常规Westerns中不明显的RTK条带（粗箭头）之外，在免疫沉淀的裂解物中还出现了一条上方的非特异性条带（窄箭头）。免疫荧光显微镜检查表明在达可替尼（而非拉帕替尼）治疗的细胞中，EGFR和HER2染色丢失。将22Rv1细胞用DMSO，2 μM拉帕替尼或2 μM达可替尼处理72小时，然后固定并用抗EGFR抗体（如若丹明标记的抗体）和抗HER2（如FITC标记的抗体）和DAPI（蓝色）。合并的图片描述了共定位。在含雄激素的培养基中培养22Rv1（上）或C4-2（下）细胞，并用2uM拉帕替尼或达可替尼处理72小时。

　　百分数DMSO被用作对照。（上部）拉帕替尼治疗可导致明显的EGFR和ErbB3膜染色。达可替尼治疗导致EGFR和ErbB3蛋白消失。细胞数量也似乎大大减少。达克替尼还降低C4-2细胞中HER2和EGFR的染色强度。蛋白质印迹比较了达克替尼和拉帕替尼对磷酸化p44 / 42 ERK1 / 2（Thr202 / Tyr204）和磷酸化AKT（Ser473）的作用。

　　免疫荧光成像显示达克替尼可改变EGFR膜染色，但不会破坏膜本身。细胞用抗E-钙粘蛋白（若丹明标记）和EGFR（FITC标记）染色。在对照细胞中，EGFR与E-钙粘蛋白共定位，表明这两种蛋白均在质膜中表达。用2 μM拉帕替尼治疗后，共定位增强，表明EGFR在膜中的定位增加。另一方面，2 μM达科替尼降低了膜中的EGFR水平，但保留了E-钙粘蛋白水平不变，表明膜的完整性未受到损害。图片以×100放大现在达克替尼的作用也是非常不错，更多详情可咨询下方微信。