泰瑞沙/奥希替尼克服了T790M介导的靶向药耐药

　　第一代EGF受体酪氨酸激酶抑制剂（EGFR TKI）在患有晚期EGFR突变（EGFRm +）非小细胞肺癌（NSCLC）的患者中提供了显着的临床益处。患者最终发展为疾病进展，通常是由获得第二个T790M EGFR TKI抗性突变引起的。奥希替尼（泰瑞沙）是新型的口服，有效和选择性的第三代EGFRm +致敏突变体和T790M抗性突变体不可逆抑制剂，可避免野生型EGFR。这种单苯胺基-嘧啶化合物在结构上不同于其他第三代EGFR TKI，并且在药理学上与前一代EGFR TKIs有所不同。临床前，该药物在体外有效抑制EGFRm +和EGFRm + / T790M突变细胞系的信号通路和细胞生长，对野生型EGFR系具有较低的活性，在EGFR突变型肿瘤异种移植和转基因模型中转化为深刻而持续的肿瘤消退。原则上证明了两名晚期EGFRm T790M + NSCLC患者的治疗。

　　奥希替尼具有与其他第三代TKI WZ4002和CO-1686不同的化学结构。前两种化合物具有许多共同的结构特征（例如，与存在于EGFR（Cys 797）中的保守半胱氨酸残基反应的亲电子官能团的位置，杂原子连接的嘧啶4-取代基和嘧啶5-的存在）取代基），奥希替尼在架构上是独一无二的。除其他差异外，亲电子官能团位于嘧啶C-2取代基环上，嘧啶4-取代基为C键连接和杂环，嘧啶5-位无取代。

　　在EGFR重组酶测定（Millipore）中，奥希替尼对L858R的表观IC50为12 nM，对L858R / T790M的表观IC50为1 nM。由于活性酶的量随时间变化，因此IC50是不可逆的，因此IC50与时间有关。该药物对L858R / T790M的功效比野生型EGFR高出近200倍，与早期TKIs相比，突变型EGFR选择剂的设计目标是一致的。后续鼠体内研究表明奥希替尼被代谢产生至少两种循环代谢物AZ5104和AZ7550。在生化分析中，AZ7550具有与亲本相当的效能和选择性。相反，尽管AZ5104表现出相同的总体特征，但它对突变型和野生型EGFR形式更有效，因此与亲本相比具有较小的选择性裕度。

　　奥希替尼显示出最小的脱靶激酶活性，只有有限数量的其他激酶在1μM时显示出超过60％的抑制作用，并具有中等的IC50效力，例如ErbB2 / 4，ACK1，ALK，BLK，BRK，MLK1和MNK2。活性代谢物显示出与母体相似的次要靶标特征。鉴于奥希替尼如上所述与EGFR中的Cys797共价键，我们特别感兴趣的是探索在类似激酶结构域位置具有半胱氨酸残基的其他激酶的功效。在人类kinome中存在的其他9种与EGFR类似的Cys797的激酶中，奥希替尼仅在针对ErbB2，ErbB4和BLK的生化测定中显示出显着活性，支持奥希替尼赋予的总体高度选择性。

　　除了针对常见的激活/敏化EGFR突变体的活性外，我们还评估了奥希替尼对其他罕见的与对第一代EGFR TKI的敏感性或耐药性相关的EGFR突变体的效力。用编码EGFR G719S，L861Q，外显子20插入（H773-V774HVdup），外显子19插入（I744-K745insKIPVAI）或EGFR变体III（EGFRvIII;在脑胶质母细胞瘤中发现的cDNA）转染293细胞，并用递增浓度的厄洛替尼，阿法替尼，奥希替尼，代谢产物AZ5104或AZD8931处理6小时。使用抗磷酸-EGFR（Y1173）和总EGFR的抗体对相应的裂解物进行免疫印迹。尽管与这些突变的EGFR形式的AZ5929代谢产物相比，奥希替尼的效力稍弱，但所有EGFR TKIs均对EGFR L861Q（与激酶谱数据相一致），G719S和外显子19插入均有效。没有一个TKI对外显子20插入突变有效。对于EGFRvIII突变体，与afatinib和AZD8931相比，奥希替尼的效能更低。但是，AZ5104显示了较高的活动水平。这些数据与vIII突变体的激酶活性（与其野生型EGFR相似）一致。

　　我们同样探索了针对在NSCLC中发现的HER2突变的活性。与afatinib和AZ5104相比，奥希替尼对H1781细胞表现出中等效力，该细胞在HER2外显子20的G776处有VC插入，IC50为80 nM。但是，奥希替尼在抑制这些细胞的生长上比厄洛替尼更有效。各种TKI对H1781细胞中HER2相关信号的影响与这些结果一致。在包含NSCLC中常见的HER2突变体的293细胞转染子（外显子20 YVMA 776-779ins）中观察到了相似的活性。因此，在患者中，奥希替尼及其代谢产物AZ5104也可能靶向肿瘤中的HER2，这取决于所获得的临床暴露。微信扫描下方二维码了解更多：