肿瘤耐药一直是肿瘤临床治疗中的难题。大量的研究试图通过耐药细胞系的表达谱来寻找耐药相关基因。最常见的一种方法建立药物耐药细胞株应承担的模型是逐渐增加药物concentration或延长作用时间常数浓度的药物，22日，这样药物耐药细胞株与减少药物敏感(例如IC50)。通过比较耐药细胞系和亲本细胞系之间表达差异的基因，可以研究耐药机制和耐药相关基因。然而，目前还没有统一的标准来确定耐药细胞系模型的建立是否成功。
在之前的一项研究中，紫杉醇耐药A549细胞系(A549/紫杉醇)是通过逐渐增加紫杉醇浓度处理A549细胞6个月而产生的。A549/紫杉醇的细胞似乎纺锤形，细长，应承担A549/紫杉醇的IC50值是72.87倍的A549.18奥希替尼检测耐药细胞株PC9/AZDR成立的培养逐渐增加的浓度奥希替尼1μM(从10海里)大约六个月，和PC9/AZDR细胞也对其他EGFR高TKIsCO1686afatinib、吉非替尼，埃罗替尼等。奥希替尼‐耐奥希替尼细胞系HCC827/AZDR是在奥希替尼浓度梯度(0.02至0.16电势M)升高的6个月的条件下选择产生的。HCC827/AZDR细胞的IC50值是HCC827细胞的315.8倍。从形态上看，HCC827/AZDR表现为间充质样表型，包括纺锤形外观、细胞间连接缺失和极化。
在本研究中，奥希替尼‐耐奥希替尼的H1975和HCC827细胞系(H1975/AZDR和HCC827/AZDR)通过6个月的时间，将奥希替尼的浓度从93nM逐渐增加到10uM来诱导。我们的H1975/AZDR和HCC827/AZDR细胞也显示出间充质样表型，如纺锤形和细胞粘附丧失。H1975/AZDR和HCC827/AZDR细胞的IC50和侵袭能力明显增强。H1975/AZDR和HCC827/AZDR的增殖率远低于H1975和HCC827，这可能是亲本系和抗性系之间某些细胞周期调控分子表达差异的结果。我们将进一步研究相关的细胞周期调控机制。
环状rna是近年来发现的一种新型功能性ncrna，参与多种癌症的发生，并可作为潜在的肿瘤标志物。已证实有23，24个CircRNAs，如circ_ITCH、13个circ_0013958、14个circ_100876、15个circ_CCDC6625与肺癌的发生、发展、TNM分期、病理分级、淋巴结转移、耐药密切相关。Circ_ITCH显著减少肺癌组织和抑制肺癌细胞的增殖，表达下调致癌米尔和米尔214和增强其父母的基因，ITCH.13Upregulationhsa_circ_0013958可能促进增殖和入侵，抑制肺腺癌的细胞凋亡hsa_circ_0013958/miR量134/周期蛋白D1的通路，可作为肺腺癌早期检测和筛查的潜在非侵入性生物标志物。
CircRNA_100876显著升高在非小细胞肺癌和与淋巴结转移有密切的关系，肿瘤分期和总生存期，可以作为一个潜在的预后生物标志物和治疗目标NSCLC.15CircRNACCDC66高度表达EGFR检测抗H1975细胞，是由HGF/c满足增加epithelial-mesenchymal过渡(EMT)和肺腺癌细胞的耐药性。circRNA谱在肿瘤耐药机制方面的最新研究十分有限；相关报道仅在吉西他滨耐药的胰腺导管腺癌和化疗药物耐药的肺、乳腺和结肠癌细胞中发现。到目前为止，还没有研究调查对第三代EGFR‐TKIs获得性耐药的NSCLC中的circRNA谱。
在本研究中，我们首次使用circRNA芯片获得了奥希替尼耐药NSCLC细胞中circRNA的表达谱。共有15504个circRNAs是显著的失调控环状rna(FC≥2.0；(P<0.05)，其中上调的circRNAs7966个，下调的circRNAs7538个。
表达上调的circrnahsa_circ_0043632和hsa_circ_0043634剪切自KRT17，KRT17在高转移性癌症26中表达上调，已被用作乳腺癌27和皮肤鳞状癌的病理诊断标志物。拼接hsa_circ_001908828ANKRD1超表达，与EMT的特性，抗高细胞凋亡和抗第二和第三代EGFR检测TKIs在NSCLC.29FXYD3，拼接hsa_circ_0050581和hsa_circ_0050580在几种常见癌症，可能是抵抗癌症治疗的一个标志。乳腺癌细胞中FXYD3的沉默可增强阿霉素和过辐射对细胞存活的影响。
AREG连接hsa_circ_0069997和hsa_circ_0069996，介导恶性肿瘤的侵袭、迁移、stemness和耐药。Hsa_circ_0023302剪切自MYEOV基因，可促进结直肠癌的增殖、侵袭和迁移。然而，将耐药细胞模型的研究结果用于指导临床应用仍存在争议。癌细胞的差异表达可能主要反映对药物治疗的反应，而不一定与抗肿瘤耐药有关。因此，从耐药细胞模型中筛选出的耐药基因标记的临床相关性需要在临床组织样本中进一步验证。
关于circRNAs的机制，circRNAs可以与miRNAs相互作用，发挥海绵的作用，通过circRNA‐miRNA‐mRNA途径阻止miRNA调控基因表达。我们的结果表明，hsa_circ_0043632可以作为miR‐6861‐3p、miR‐492、miR‐4743‐5p、miR‐6829‐3p和miR‐6778‐3p的海绵。其中，miR-492被报道参与多种肿瘤的细胞增殖、细胞周期、迁移、总存活和化疗耐药，如宫颈鳞状细胞癌和肝癌、乳腺癌和结肠癌。TIMP2作为miR-492的直接靶点，36对调节癌细胞迁移和侵袭至关重要。hsa_circ_0043632是否通过hsa_circ_0043632/miR‐492/TIMP2轴调控NSCLC的增殖、迁移、侵袭和奥希替尼(泰瑞沙)‐耐药，还需要进一步的研究。
在本研究中，我们通过KEGG分析研究了环状rna表达异常的功能。途径与circRNAs特异表达，P53，mTOR，粘着斑信号通路之前被证明是关键路径在癌症细胞的反应奥希替尼检测电阻的非小细胞肺癌，42岁，43岁，44岁表明circRNAs特异表达可能在耐药细胞反应具有重要意义。
Huang等人发现p53的缺失始终与获得性EGFR抑制剂耐药有关，而p53的恢复足以逆转EGFR抑制剂耐药。42mTOR通路广泛参与调控细胞增殖、生长、凋亡等细胞功能，mTOR的激活常与多种肿瘤的耐药、发生、发展有关。研究表明，抑制mTOR通路可通过诱导自噬调节肿瘤耐药。调控异常的circRNAs是否能够调控NSCLC的增殖、凋亡、迁移、侵袭、自噬以及奥希替尼耐药等有待进一步研究。
据我们所知，这是首个报道环状rna在NSCLC耐药中异常表达的研究。我们的研究结果为NSCLC患者的治疗提供了有前景的潜在分子靶点，为NSCLC的分子靶向药物治疗提供了坚实的基础和有效的工具。需要进一步的研究来确定环状rna失调对奥希替尼‐耐药的NSCLC的影响。详情请扫码咨询：
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