卡马替尼(capmatinib)治疗奥希替尼耐药性的潜力

　　背景：最初对酪氨酸激酶抑制剂 (TKI) 有反应的非小细胞肺癌 (NSCLC) 患者最终由于 EGFR 突变的积累和其他较少研究的机制（如肿瘤微环境 (TME) 的参与）而产生耐药性。在此，我们研究了 MET 抑制剂卡马替尼（capmatinib）治疗奥希替尼耐药性 NSCLC 并使 TME 正常化的潜力。

　　结果：我们首先确定 HCC827 和 H1975 细胞在与从奥希替尼耐药患者中分离的 CAF 共培养时显示出对奥希替尼的耐药性增加。此外，我们发现 CAFs 促进了 HCC827 和 H1975 细胞的上皮间质转化 (EMT) 和自我更新能力。我们随后发现 CAF 培养的 HCC827 和 H1975 均显示出显着更高的 MET、Akt、Snail 和 IL-1β 表达，这与存活和炎症反应有关。这些细胞反过来又促进了正常肺成纤维细胞产生 CAF。随后，我们观察到卡马替尼的治疗导致 CAF 共培养的 H1975 和 HCC827 对奥希替尼的再敏化，与 EMT 和自我更新能力降低相关。使用 siRNA 的 MET 沉默实验支持使用卡马替尼进行的观察，同时具有更大的幅度。MET 沉默的细胞表现出严重阻碍炎症标志物 IL-1β 和 NF-κB 的表达；EMT 标记、Snail 和波形蛋白，同时增加 E-钙粘蛋白。最后，我们证明了 capmatinib 和 osimertinib 的组合导致肿瘤抑制增加和患者来源的异种移植 (PDX) 模型中 CAF 的数量显着减少。

　　结论：综上所述，我们的研究结果表明 NSCLC 细胞与其 TME (CAF) 之间 MET/Akt/Snail 信号传导增加，导致奥希替尼耐药。卡马替尼（capmatinib）对该通路的抑制可能绕过 EGFR 激活突变，并通过靶向肿瘤细胞和 CAF 来克服奥希替尼耐药性。

　　在这里，我们首先证明了与来自奥希替尼耐药患者、NSCLC 细胞系、H1975 和 HCC827 的 CAF 共培养变得更具奥希替尼耐药性，并显示出形成集落、肿瘤球和迁移的能力增强。CAF 介导的效应伴随着 EMT、干细胞和存活通路（包括 EGFR、MET、Akt 和 β-catenin）中表达的增加。同时，奥希替尼耐药的 NSCLC 细胞通过分泌 CAF 转化细胞因子、PDGF 和 TGFβ 促进 CAF 的产生，有利于疾病进展。我们证明，通过卡马替尼和奥希替尼联合方案（抑制 MET/Akt/EGFR）破坏这种肿瘤-CAF 通讯回路可以克服奥希替尼耐药性。最后，我们在体外验证使用源自患者的异种移植小鼠模型的数据显示，卡马替尼联合奥希替尼的功效可抑制奥希替尼耐药癌细胞的肿瘤生长。我们的观察结果为通过双重抑制 EGFR/MET 和减少 CAF 的产生来治疗奥希替尼耐药的 NSCLC 患者提供了临床前证据。

　　我们还发现，与对奥希替尼敏感的对应物相比，从患者身上获得的奥希替尼耐药肺癌细胞通过释放显着更高量的 TGFβ1 来增强 CAF 转化。这一现象证实了我们的观点，即肿瘤细胞和 CAF 之间的细胞通讯至少在一定程度上促进了奥希替尼耐药。这些临床奥希替尼 NSCLC 细胞的 CAF 转化能力增加与 MET、Akt、EGFR 和波形蛋白信号传导增加有关，所有这些都有助于细胞存活、增殖和 EMT。基于这些发现，我们探索了使用卡马替尼联合奥希替尼抑制 MET 信号传导的可能性。我们发现卡马替尼治疗随后奥希替尼显着重新敏化了 CAF 训练的奥希替尼耐药 H1975 细胞和 OR 细胞（从患者中获得的奥希替尼耐药 NSCLC）。这种卡马替尼-奥希替尼序贯治疗方案似乎通过两种主要途径克服了奥希替尼耐药性。首先，抑制多种致癌信号网络，包括 EGFR、MET、Akt 和 EMT/stemness 信号、Snail 和 β-catenin。其次，通过使肿瘤微环境正常化的间接方式，卡马替尼-奥希替尼联合方案导致奥希替尼耐药 NSCLC 的 TGFβ1 分泌减少，从而促进 CAF 转化。

　　随后，我们还通过功能获得和功能丧失实验证明了 MET 在促进奥希替尼方面的重要功能。值得注意的是，MET 沉默导致奥希替尼耐药 (OR) 细胞中对奥希替尼的敏感性增加。有趣的是，先前发现 MET 表达通过激活 ERBB3 与对吉非替尼（第一代 TKI）的耐药性相关 。根据我们的实验结果，我们还观察到其他标志物如 Akt 和 β-catenin 的下调。一致认为，最近的一项研究表明，小分子对 MET 和 PI3K（Akt 上游）的双重抑制可以抑制 NSCLC 肿瘤发生。此外，β-连环蛋白表达的抑制导致奥希替尼耐药 OR 细胞的自我更新能力显着降低，使它们对随后的奥希替尼治疗更加敏感。这一发现得到了先前报道的部分支持，其中 β-连环蛋白的抑制导致其他信号网络如 TRAIL、Akt 和 CDK6 的抑制。更重要的是，MET 沉默后 Snail 表达的减少也可能有助于 OR 细胞中的奥希替尼再敏化。EMT 标记如 Snail 和 Twist1 与化疗耐药性的获得有关。这些体外在我们的 PDX 小鼠模型中证实了观察结果，其中卡马替尼和奥希替尼的联合治疗在仅奥希替尼和仅卡马替尼方案中提供了最显着的肿瘤抑制作用。此外，与所有其他组相比，接受联合治疗的小鼠的存活率最高。总的来说，这项研究通过抑制 MET/Akt/Snail 信号传导和 CAF 转化，为使用卡马替尼（capmatinib）治疗奥希替尼耐药的 NSCLC 细胞提供了临床前支持。

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