英立达/阿西替尼的抗血管生成特性

　　包括阿西替尼（英立达）在内的酪氨酸激酶抑制剂 (TKIs) 已被引入肾细胞癌 (RCC) 的治疗中，因为它们具有抗血管生成的特性。然而，目前没有证据表明阿西替尼在 RCC 中具有直接的细胞毒性抗肿瘤活性。

　　在本文中，我们通过蛋白质印迹分析报告，阿西替尼治疗诱导 DNA 损伤反应 (DDR)，最初以 γ-H2AX 磷酸化和 Chk1 激酶激活为特征，随后在 A-498 和 Caki-2 RCC 细胞中通过 p21 过度表达为特征，尽管具有不同的效力。通过免疫细胞化学分析细胞 DNA 中 8-oxo-7,8-dihydro-2'-deoxyguanosine 的存在和使用氧化还原敏感荧光染料 DCFDA 的流式细胞术，表明 DDR 反应伴随着氧化性 DNA 损伤的存在和活性氧 (ROS) 生成。这种反应导致 G2/M 细胞周期停滞并诱导衰老样表型，伴随着细胞增大和衰老相关的 β-半乳糖苷酶活性增加，这些都被 N-乙酰半胱氨酸 (NAC) 预处理所消除。此外，

　　另一方面，阿西替尼通过 DDR 诱导也能够增加表面 NKG2D 配体的表达。因此，药物治疗以 ROS 依赖性方式促进 A-498 RCC 细胞中 NK 细胞的识别和脱粒。

　　总的来说，我们的结果表明对 RCC 细胞的细胞毒性和免疫调节作用都有助于阿西替尼的抗肿瘤活性。

　　肾细胞癌 (RCC) 占所有恶性肿瘤的 2-3%，2013 年欧洲约有 84,400 例新病例和 34,700 例癌症相关死亡。几乎三分之一的患者在诊断时出现转移性疾病，另外 20% 的患者在肾切除术后出现转移。

　　Axitinib 是一种有效的选择性 VEGFR 1、2 和 3 抑制剂，于 2012 年获得 FDA 批准，用于治疗既往全身治疗失败后的转移性 RCC (mRCC) 患者。欧洲药品管理局已于 2015 年批准使用阿昔替尼治疗先前使用舒尼替尼或白细胞介素 2 (IL-2) 治疗失败后的晚期肾癌。也有报道将其用作晚期或 mRCC 的一线治疗。

　　在这项研究中，我们证明了阿西替尼（英立达）治疗在 RCC 细胞中触发 DNA 损伤反应、细胞周期停滞和衰老以及有丝分裂灾难的能力。此外，我们进一步评估了阿西替尼增加 NKG2D 和 DNAM-1 配体表面表达以及增强 NK 细胞对 RCC 细胞的识别和活性的能力。

　　TKI，特别是阿西替尼最近已被批准用于治疗晚期 mRCC，主要是因为它们的抗血管生成特性。在此，我们提供的证据表明，阿西替尼的抗肿瘤活性也可能是其诱导 DDR、细胞衰老和有丝分裂灾难，以及通过调节激活配体增强先天免疫效应细胞对 RCC 细胞的识别能力的结果。

　　特别是，我们发现用次优剂量的阿西替尼（英立达）治疗 RCC 会触发 DDR，这表现为 H2AX、Ser317-和 Ser345-Chk1 磷酸化和 DNA 氧化水平的增加，导致细胞周期停滞在 G2/M 期和细胞衰老。在稍后的时间点，观察到细胞周期抑制剂 p21 的过度表达，并且与 Chk1 激活和耗竭水平的降低平行。在这方面，在逆转录病毒介导的 p21 转导后，PC-3 前列腺癌细胞中衰老程序的重新激活被描述为抑制 Chk1 激活。

　　我们还研究了氧化还原信号传导对阿西替尼治疗诱导 A-498 和 Caki-2 RCC 细胞衰老能力的影响。我们发现药物暴露会增加 ROS 的产生并诱导 DNA 氧化，而用抗氧化剂 NAC 预处理会导致细胞周期停滞受损和 SA-β-gal 阳性细胞的百分比降低。

　　与我们的研究类似，据报道，用阿西替尼治疗胃癌细胞会诱导衰老表型，其特征是细胞大小增加、SA-β-半乳糖苷酶表达和 G2 细胞周期停滞。

　　细胞周期停滞和衰老通常与有丝分裂灾难有关。CHK1，其调节G2 / M关卡激酶，也是用于防止有丝分裂灾变。有丝分裂灾难已被描述为抗癌药物诱导的细胞死亡的主要形式。与坏死类似，有丝分裂灾难显示质膜完整性的早期丧失，大细胞含有未浓缩的染色体。用阿西替尼治疗导致细胞发生坏死样死亡和继发性坏死以及有丝分裂灾难的频率增加，其特征是多核、异常微管组装、早期膜透化和缺乏细胞凋亡特征，如半胱天冬酶 3 激活和 DNA 片段化。

　　我们的研究还提供了证据，表明阿西替尼（英立达）治疗增加了先天免疫效应细胞识别的应激诱导配体的表面表达。微信扫描下方二维码了解更多：