赛可瑞/克唑替尼对横纹肌肉瘤的活性

　　横纹肌肉瘤 (RMS) 是儿童和青少年中常见的恶性软组织肿瘤。间变性淋巴瘤激酶 (ALK) 和 MET 基因的异常表达与 RMS 的恶性进展有关，尤其是在肺泡亚型中。这一观察结果表明，克唑替尼 (赛可瑞) 是一种针对 ALK 和 MET 的激酶抑制剂，可能在 RMS 中具有治疗作用，尽管尚未研究其在这种恶性肿瘤中的抗肿瘤活性。

　　方法

　　RH4 和 RH30 肺泡 RMS (ARMS) 细胞系用克唑替尼处理，然后通过增殖、活力、迁移和集落形成试验进行评估。使用多种方法，包括流式细胞术、免疫荧光、蛋白质印迹和基于 siRNA 的敲低，以研究与克唑替尼活性相关的可能分子机制。

　　结果

　　体外用克唑替尼治疗抑制 ALK 和 MET 蛋白，以及胰岛素样生长因子 1 受体 (IGF1R)，伴随着 AKT 和 ERK（两种参与 RMS 细胞增殖和存活的下游激酶）的强烈去磷酸化。暴露于克唑替尼会损害细胞生长，G2/M 期的积累归因于检查点调节因子的表达和激活的改变，例如细胞周期蛋白 B1 和 Cdc2。克唑替尼能够以剂量依赖性方式诱导细胞凋亡和自噬，分别通过 caspase-3 激活/PARP 蛋白水解切割下调和 LC3 激活/p62 下调显示。活性氧 (ROS) 的积累似乎有助于 RH4 和 RH30 细胞中的克唑替尼效应。而且，

　　结论

　　这些结果提供了对克唑替尼在 ARMS 细胞中影响的分子机制的进一步了解，推断它可能是 ARMS 癌症治疗的有用治疗工具。

　　最近的临床研究报告了克唑替尼（一种 ALK/MET 活性的 ATP 竞争性抑制剂）在治疗 ALK 和/或 MET 阳性肿瘤中的有希望的治疗效果。然而，它在 RMS（儿童常见的软组织肉瘤）中的抗肿瘤特性，直到最近才受到质疑。对 ALK 在 RMS 中的表达和致癌活性越来越感兴趣暗示克唑替尼在这种恶性肿瘤中可能具有治疗作用。

　　因此，本研究调查了克唑替尼对 RH4 和 RH30 人 ARMS 细胞系的可能影响和分子机制，这些细胞系在 mRNA 和蛋白质水平上过表达 ALK 和 MET 基因。克唑替尼处理的细胞在临床相关浓度 (≤5 μM) 下显示出增殖和活力的显着降低。有趣的是，根据 Peron 等人最近发表的一篇文章，两种肿瘤细胞系中细胞生长的减少主要与细胞周期停滞和细胞凋亡/自噬有关。该研究强调，在克唑替尼暴露后，RH4 和 RH30 细胞在 G2/M 期积累，并表现出形态学改变，例如细胞核增大或多核，这是细胞分裂缺陷的特征。

　　这归因于重要的细胞周期调节剂的放松管制。特别是，克唑替尼治疗导致细胞周期蛋白 D3 表达的下调和 p21/p27 蛋白的过度表达。在这方面，据报道与 CDK4 相关的细胞周期蛋白 D3 活性是紫外线辐射后细胞周期从 G2 期进入有丝分裂所必需的。更具体地说，克唑替尼导致 Cdc25C 蛋白在细胞质中滞留，并导致 Cdc2 在 Thr14/Tyr15 处过度磷酸化，而细胞周期蛋白 B1 过度表达并主要在核膜周围积累。

　　综上所述，这些数据表明克唑替尼通过将 Cdc25C 隔离在细胞质中从而促进 Cdc2 的磷酸化来激活 ARMS 细胞中的 G2/M 检查点，从而促进 Cdc2 的磷酸化，后者无法与细胞周期蛋白 B1 形成活性复合物，从而阻止进入正如其他癌症中所报道的那样，细胞核和有丝分裂停滞。此外，细胞周期扰动也可能与克唑替尼改变细胞微管动力学的能力有关，正如多极纺锤体的形成所揭示的那样。微信扫描下方二维码了解更多：