劳拉替尼(Lorlatinib)可减弱 PDAC 的生长

　　最近的研究表明，在 PDAC 中调节 TME 成分可以改善对化学疗法或免疫疗法的治疗反应。为了确定劳拉替尼（Lorlatinib）是否可以提高化疗的疗效，我们用吉西他滨（50 mg/kg）单独或与劳拉替尼（5 mg/kg）联合治疗患有原位 KPC 肿瘤的小鼠。与报道的结果一致，我们发现吉西他滨治疗对原位肿瘤的重量几乎没有影响。相比之下，与我们之前的结果相似，劳拉替尼治疗显着降低了肿瘤重量。然而，与单独使用劳拉替尼相比，当劳拉替尼与吉西他滨联合使用时，我们没有观察到肿瘤重量有任何进一步降低。我们通过流式细胞术分析了来自所有治疗组的肿瘤的免疫细胞组成，发现与对照组相比，所有治疗组的中性粒细胞积累减少。我们没有看到任何治疗组之间的单核细胞、巨噬细胞或 CD8 T 细胞有任何差异。通过肿瘤切片的 IHC 证实了嗜中性粒细胞积累的减少。最后，我们通过 IHC 分析了来自所有治疗组的肿瘤中的增殖、纤维化和成纤维细胞积累，发现与单独使用劳拉替尼相比，将吉西他滨添加到劳拉替尼中没有额外的好处。这些结果支持了先前关于吉西他滨治疗对 PDAC 几乎没有影响的报告，并进一步表明在 PDAC 中联合劳拉替尼和吉西他滨没有附加效应。

　　为了确定劳拉替尼是否可以改善 PDAC 中对免疫疗法的反应，我们用单独的抗 PD-1 或与劳拉替尼 (5 mg/kg) 联合治疗了携带原位 KPC 肿瘤的小鼠。与之前的报告一致，我们发现与对照组（对照 IgG + 载体）相比，抗 PD-1 治疗对原位肿瘤的重量没有影响。然而，当与劳拉替尼联合使用时，与对照组或单一治疗组的肿瘤相比，抗 PD-1 导致的肿瘤明显更小。我们通过流式细胞术和肿瘤切片的 IHC 染色证实了用劳拉替尼单独治疗或劳拉替尼联合抗 PD-1 治疗的小鼠肿瘤中中性粒细胞的积累减少（图 2）。有趣的是，虽然单独使用抗 PD-1 或劳拉替尼治疗不足以刺激肿瘤中 CD8+T 细胞的增加，但劳拉替尼和抗 PD-1 的联合治疗显着增加了 CD8+T 细胞的积累，两者均可见流式细胞术和 IHC 染色。此外，劳拉替尼和抗 PD-1 联合治疗也导致更多活化的 CD44+CD69+CD8+T 细胞。综上所述，这些数据表明，劳拉替尼治疗可以使无反应的 PDAC 肿瘤对抗 PD-1 阻断剂的免疫疗法产生反应。

　　劳拉替尼（Lorlatinib）通过抑制中性粒细胞积累来减弱 PDAC 的生长

　　Lorlatinib显示有希望的临床试验中与来自非小细胞肺癌患与遗传重排的患者结果ALK或ROS1，但是，只有人PDAC患者的非常小的百分比具有可检测的表达ALK。基于我们对体外嗜中性粒细胞的结果，我们决定测试劳拉替尼是否可以在体内抑制 PDAC 肿瘤生长。我们将 KPC mT4 细胞注射到健康同基因小鼠的胰腺中，并在 14 天后开始使用每日口服剂量的劳拉替尼 (5 mg/kg) 治疗已建立的肿瘤，再持续 14 天。注射肿瘤细胞后 28 天对小鼠实施安乐死并进行分析。与载体治疗的小鼠相比，劳拉替尼治疗的小鼠中 PDAC 肿瘤的重量显着降低。当通过 IHC 染色检查肿瘤的增殖标志物（Ki67）和细胞凋亡（裂解的半胱天冬酶 3）时，我们观察到增殖减少，但细胞凋亡没有差异。PDAC 肿瘤的特点是 ECM 的过度沉积，这被认为通过限制药物递送和高度的免疫细胞浸润来影响治疗效果。为了确定劳拉替尼是否调节 PDAC TME 的这些方面，我们进行了流式细胞术和 IHC 染色，以分别评估来自载体或劳拉替尼治疗小鼠的肿瘤的免疫细胞组成和纤维化。我们没有检测到CD45+中 F4/80+巨噬细胞、Ly6C+单核细胞、Nk1.1+NK 细胞或 CD3+T 细胞的百分比有任何差异肿瘤中的免疫细胞。相比之下，我们在劳拉替尼治疗的小鼠中检测到 B220+B 细胞显着增加和 Ly6G+中性粒细胞减少。由于 B 细胞在 PDAC 中主要是促肿瘤发生的，我们专注于劳拉替尼对中性粒细胞的影响。我们通过肿瘤切片的免疫荧光染色证实，劳拉替尼治疗减少了 PDAC 肿瘤中的中性粒细胞数量。接下来，我们通过 IHC 分析了肿瘤的纤维化。我们发现劳拉替尼处理的小鼠的纤维化水平显着降低，如与媒介物处理的小鼠相比，胶原沉积减少和αSMA+成纤维细胞数量减少所见。结合我们在体外用中性粒细胞获得的结果，这些数据表明劳拉替尼通过抑制中性粒细胞积累和减少 TME 中的肿瘤相关纤维化来抑制 PDAC 进展。

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