Na+/H+交换调节因子1对克唑替尼Crizotinib敏感性的改变

　　背景：　　

　　Na+/H+交换调节因子1（NHERF1）是重要的支架蛋白，参与多种细胞内信号途径的调节。NHERF1能够增强化学药物对乳腺癌和宫颈癌细胞的作用。间变性淋巴瘤激酶（ALK）融合突变是经过验证的针对肺癌的分子靶向疗法，其中克唑替尼可用作抑制肿瘤进展的特异性抑制剂。但是，由于ALK突变的发生频率较低，并且用于确定药物反应的因素复杂，因此尚不清楚可改变克唑替尼敏感性的基因。　　

　　方法：　　

　　收集组织切片中ALK易位和ALK阴性的肺腺癌标本进行免疫组织化学分析。使用ALK阳性和克唑替尼敏感的肺腺癌细胞系H3122，研究了NHERF1的可能机制及其在细胞对克唑替尼的敏感性中的作用。将NHERF1过表达载体或用于NHERF1敲低的试剂用于克唑替尼敏感性测定，并与细胞活力和细胞凋亡检测结合使用　　

　　结果：　　

　　在ALK易位的NSCLC中，NHERF1的表达水平明显高于其他肺癌组织。ALHER阳性肺癌细胞中NHERF1的表达受ALK活性的调节，并且能够改变对克唑替尼的敏感性。NHERF1影响克唑替尼敏感性的功能取决于其在细胞质中的亚细胞分布，而不是其核的局部形式。　　

　　结论：　　

　　异位过表达的NHERF1可能是考虑抑制肺癌的功能蛋白。确定ALK阳性NSCLC组织中NHERF1的水平可能有助于预测克唑替尼耐药性，尤其是通过区分胞浆或核定位的NHERF1来表达过量的分子。　　

　　Na+/H+交换调节因子1（NHERF1）是四个蛋白质家族（NHERF1，NHERF2，NHERF3，NHERF4）中的重要分子。NHERF1通常被认为是一种多功能细胞支架蛋白，在ezrin-radixin-moesin结合元件上游包含PDZ1和PDZ2的两个结构域。已知NHERF1与多种在人类癌症中非常重要的蛋白质相互作用，包括血小板衍生的生长因子受体（PDGFR）以及磷酸酶和张力蛋白同源物（PTEN）。通过平衡PI3K/Akt致癌信号，NHERF1增强了细胞对PDGFR抑制剂的反应。保守的PDZ域内NHERFN末端的突变阻碍了它与SYK的相互作用，促进了乳腺癌的进展。NHERF1与EGFRC末端的结合抑制了其磷酸化并减弱了下游信号传导。　　

　　NHERF1的差异和异源表达与几种组织的进展有关。在极化的结直肠上皮细胞中，NHERF1分布在根尖腔，但在癌症病例中被破坏。在转化的细胞中，胞质异位NHERF1表达增加细胞增殖并加速恶性表型的发展。在大肠癌的癌变早期，核NHERF1与不良预后相关。在HCC模型中，NHERF1和β-catenin共定位于细胞核中，并充当Wnt信号的正向调节剂，并促进了恶性表型。在乳腺癌中，导管原位癌（DCIS）期间胞质NHERF1的增加和膜定位的减少转化为浸润性和转移性。这些数据表明，基于其表达和细胞分布，NHERF1可能有助于癌症的进展。　　

　　肺癌是世界范围内发病率和发病率最高的癌症，其中约85％为非小细胞肺癌（NSCLC）。经过优化的化疗程序，其五年生存率仅为15％左右。使用靶向疗法的最新发展极大地鼓励了对新型肺癌标志物的筛选，以进行有效的药物或治疗评估。发现EGFR突变后，间变性淋巴瘤激酶基因（ALK）是NSCLC的新驱动基因。ALK是一种1620个氨基酸的跨膜蛋白，由细胞外配体结合，跨膜和细胞内酪氨酸激酶结构域组成。2011年，美国FDA批准了克唑替尼用于治疗ALK易位的局部晚期或转移性NSCLC患者。在所有NSCLC患者中，发生ALK转移的肺癌的诊断率为3–5％。尽管在接受靶向治疗的ALK阳性患者中报告了克唑替尼的耐药性，但迄今为止尚不清楚可能的机制。与其他药物相比，影响克唑替尼敏感性的基因报道较少，原因是患者的ALK突变频率较低。　　

　　从先前在NSCLC中的研究来看，患者血浆中的NHERF1蛋白增加了，这表明NHERF1可能对评估肿瘤的发生和发展有用。最近一项涉及26例NSCLC肿瘤穿刺和18例匹配的组织切片的研究表明，免疫组织化学中NHERF1的增加和错位可用于指示癌症的侵袭。也有报道说NHERF1在乳腺癌中引起药理作用以增强吉非替尼和伊马替尼的药物反应。在宫颈癌细胞中，NHERF1作为公认的相互作用伴侣，通过促进MRP4从细胞表面的内在化以敏化顺铂难治性，降低了MRP4的稳定性。这些发现促使我们评价NHERF1在ALK阳性NSCLC中的作用以及对克唑替尼治疗的敏感性。　　

　　在本研究中，收集组织切片中ALK易位和ALK阴性的肺腺癌标本进行免疫组化。ALK阳性和克唑替尼敏感的肺腺癌细胞系H3122被用作实验的实验室模型。将NHERF1过表达载体或用于NHERF1敲除的试剂用于克唑替尼敏感性测定，并与细胞活力和细胞凋亡检测结合使用。结果表明，NHERF1异位表达能够提高克唑替尼Crizotinib治疗的药物敏感性。我们的研究结果还表明，ALK活性和下游信号不仅参与调控NHERF1的表达，而且还影响亚细胞的定位。NHERF1可能是评估耐药性的有用参考标记。详情请扫码咨询：