克唑替尼crizotinib是潜在的ICD诱导剂

　　筛选实验的汇总分析在FDA批准的TKI中排名第（R）-克唑替尼（crizotinib）。因此，我们决定将精力集中在（R）-克唑替尼上。值得注意的是，（R）-克唑替尼在诱导U2OS细胞中的CALR-RFP重新分布和致密性方面比其对映体（S）-克唑替尼更有效，以及小鼠纤维肉瘤MCA205和肺腺癌TC1细胞。当具有差的ICD诱导剂，例如顺铂（CDDP）和丝裂霉素C（MitoC），两者都缺乏的能力原因CALR曝光组合，（R）-克唑替尼（但不是（S）-克唑替尼）能够将CALR暴露水平恢复到与MTX相同的水平。在包括U2OS，MCA205和TC1细胞在内的几种癌细胞系中均获得了这一结果。（R）-克唑替尼和其他几种临床使用的ALK抑制剂（例如色瑞替尼，恩佐替尼等）诱导U2OS细胞中eIF2α的磷酸化和ICD标志。

　　在使用了全自动的，高含量，中等通量的基于荧光的筛选程序后，以在两个酪氨酸激酶抑制剂（TKI）库中确定潜在的ICD诱导剂，即具有500多种化合物的蛋白质激酶公共化学基因组。和内部收集的FDA批准的TKI（32种化合物），目前已在肿瘤库中使用。将表达CALR-红色荧光蛋白（RFP），绿色荧光蛋白（GFP）-LC3或HMGB1-GFP融合蛋白的人骨肉瘤U2OS细胞用足以诱导脱靶效应的浓度用每种化合物处理（10 μM）。

　　使用自动荧光显微镜和自动高内涵图像分析来确定ICD的替代标志物，例如将CALR-RFP重新分布到周围的点中，产生自噬相关的GFP-LC3点在细胞质中，HMGB1-GFP从细胞核进入胞质溶胶，以及用DAPI复染的细胞核固缩。值得注意的是，两个筛查均产生了一组重叠的TKI，这些TKI能够诱导ICD特性达到与对照蒽环类米托蒽醌（MTX）相似的水平，即（R）-克唑替尼，福瑞替尼，坎尼替尼，来沙替尼和西立替尼。这组TKI确实诱导了ICD的征兆，例如免疫荧光检测到的CALR暴露以及在几种人类癌细胞系（U2OS，宫颈癌HeLa，结直肠癌HCT-116）和鼠类纤维肉瘤中将ATP和HMGB1释放至培养上清液MCA205细胞。

　　如预期的那样，将（R）-克唑替尼（而不是（S）-克唑替尼）添加到对EML4-呈阳性的人NSCLC细胞系中，可以更有效地诱导细胞凋亡和ICD标志（CALR暴露，ATP和HMGB1释放）。 ALK融合蛋白（H2228细胞）比对ALK激活易位阴性的细胞（H1650细胞）给药时有所提高）。但是，高剂量的5–10 μM（R）-克唑替尼对缺乏EML4-ALK融合蛋白的细胞具有活性。与此相反的事实是，在EML4中只能检测到代谢作用，例如糖酵解和（R）-克唑替尼抑制线粒体呼吸抑制或己糖激酶-2的下调。ALK阳性H2228细胞。（R）-克唑替尼在U2OS细胞以及H1650和H2228细胞中诱导eIF2α磷酸化，这是与CALR暴露相关的内质网应激的信号，尽管动力学不同。现在克唑替尼的价格是多少？更多详情可咨询下方微信。