为了测试达拉非尼(Dabrafenib)是否会影响巨噬细胞中的TNF-α活化,在不存在或存在达拉非尼的情况下,用LPS刺激源自骨髓的巨噬细胞。达拉非尼阻断LPS诱导巨噬细胞TNF-α表达的激活。这个体外数据可以解释为什么达布拉非尼治疗后一天(10 mg / kg,光血栓形成后1小时)检测到明显降低的TNF-αmRNA水平,尽管募集到缺血部位的Iba1阳性小胶质细胞/巨噬细胞数量相近。但是,我们对中风后4天达拉非尼缺乏持续作用感到困惑。这表明我们使用的维持剂量(5 mg / kg /天)是不够的。值得注意的是,在人类中,达拉非尼每天以两次150 mg剂量(相当于每天4 mg / kg体重,平均体重为75 kg)给药,用于治疗黑色素瘤。另一方面,在小鼠中,每天口服10 mg / kg可有效抑制肿瘤生长),我们发现腹膜内给药也有效。
值得注意的是,与第1天相比,用媒介物治疗的小鼠在第4天显示梗死体积消退(表示为脑体积百分比以纠正水肿)和其他。局部炎症可能会导致梗死面积增大,因为我们之前已经证明持续炎症的小鼠会延迟梗塞消退,这与高剂量达布拉非尼的急性抗炎作用相一致我们在中风后1天观察到。
由于肿瘤坏死因子受体(TNFR)是参与坏死病活化的主要死亡受体,因此我们提出了一种模型,其中抑制巨噬细胞/小胶质细胞产生的TNF-α可能解释了Dabrafenib限制中风损伤的部分保护作用。缺血性中风会导致营养供应突然减少,从而迅速导致患处核心部位发生不可逆转的损害。Toll样受体(TLR)可以检测到垂死细胞释放的损伤相关分子模式(DAMPS)。TLR是在许多细胞类型(包括神经元和神经胶质细胞)中广泛表达的受体家族。TLR的激活通过几个转录因子触发基因表达。干扰素调节因子(IRF)是引发先天免疫应答的TLR的主要靶标。TLRs / IRFs的激活会增加炎症细胞因子的表达,包括TNF-α,从而导致免疫细胞(如巨噬细胞)募集到损伤部位以进行组织修复(Kariko等,2004)。
另一方面,TNF-α进一步激活IRF1(Jaruga等,2004),从而增加RIPK蛋白的表达并放大TNF-α诱导的RIPK3激活和坏死。与缺血性脑损伤中TNF-α的激活相一致,在实验性中风后小鼠和中风患者的验尸神经元中,IRF1表达也在小鼠缺血性神经元中升高(Alexander等,2003)。与这些观察结果一致,缺乏IRF1的小鼠在实验性局灶性脑缺血后梗死面积较小。
发现用RIPK1抑制剂necrostatin-1阻断坏死病在缺血性脑损伤中具有神经保护作用。但是,necrostatin-1和相关的RIPK1抑制剂也表现出一定的毒性,并且大多数都没有经过关于人体安全性的临床试验。最近,达拉非尼被鉴定为RIPK3抑制剂(Li等,2014b)。重要的是,达布拉非尼已经过临床试验,并且是FDA批准的用于治疗人类黑色素瘤的药物。因此,据我们所知,我们的研究是第一个证明达布拉非尼在临床前小鼠模型中减轻中风损伤的研究。我们的发现令人兴奋,因为它表明达布拉非尼可以很容易地重新用于中风治疗。
达拉非尼的作用是否由其对RIPK3的抑制介导尚待证实。最近显示了另一种RIPK3抑制剂可保护培养的神经元免受氧气和葡萄糖剥夺引起的伤害。但是,应该指出的是,RIPK3的消融对大脑中动脉闭塞后再灌注引起的脑损伤没有影响。RIPK3基因敲除研究与我们的发现之间的差异可能源于RIPK3基因消融的补偿作用或中风模型的差异,因为光血栓形成不涉及再灌注。我们也不能排除达拉非尼对对B-raf的抑制本身可能对卒中损伤有益,正如其他B-raf抑制剂所显示的那样。现在达拉非尼的价格是多少?更多详情可咨询下方微信。
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