INC280卡马替尼对细胞的作用影响

　　卡马替尼（INC280）处理可抑制c-MET扩增的MKN45（RUNX3阳性）和SNU620（RUNX3阴性）弥漫型细胞的生长。然后，卡马替尼在MKN45细胞中显示出最高的抑制率和凋亡率，而IC50值最低，而在c-MET还原的MKN28（肠型）细胞中则没有。我们还显示，卡马替尼抑制MKN45细胞中的WNT信号通路和SNAIL表达。数据表明，卡马替尼可用作预防或治疗c-MET扩增阳性的弥漫性胃癌的治疗剂。

　　为了研究卡马替尼对有或没有RUNX3的c-MET扩增细胞的影响，在GC细胞中评估了c-MET和RUNX3蛋白的表达。c-MET和RUNX3蛋白在SNU5和MKN45细胞中表达。有趣的是，p-MET扩增的胃癌细胞系属于弥散型。我们测试了卡马替尼对MKN28，SNU620（RUNX3阴性弥漫型）和MKN45（RUNX3阳性弥漫型）细胞的剂量依赖性抑制作用。用不同浓度的INC280处理细胞48小时，并通过使用MTS分析评估细胞活力来确定最佳剂量。INC280的处理在c-MET扩增的SNU620和MKN45细胞中以剂量依赖性方式降低了细胞活力，但在c-MET还原的MKN28细胞中未降低细胞活力（n = 3）。使用非线性回归分析[IC50 = 1.7 nM（MKN45）或2.4 nM（SNU620）]确定INC280的IC50值。

　　为了确定卡马替尼对MKN28和MKN45细胞的抑制作用，使用INC280的各自IC50值，通过伤口愈合试验检查了细胞迁移。用卡马替尼处理的c-MET扩增的MKN45细胞的伤口间隙明显比处理的c-MET还原的MKN28细胞的伤口间隙宽。INC280对c-MET扩增的细胞系显示出抑制作用。

　　卡马替尼对MKN28，SNU620和MKN45细胞中细胞死亡的影响，通过用膜联蛋白V-APC / PI染色，然后进行流式细胞术检查凋亡。细胞用膜联蛋白V-APC和PI染色，分别评估早期凋亡和晚期凋亡细胞群。INC280在SNU620和MKN45细胞中显示出最佳的细胞死亡率，但在MKN28细胞中则没有。暴露于INC280 48小时后，凋亡细胞的百分比分别为22.59％和23.56±1.08％。相反，这些药物对表达低水平的c-MET的MKN28细胞没有活性。

　　为了检查卡马替尼对MKN28和MKN45细胞的抑制作用，通过分析基因和蛋白质表达来检查致癌途径。用INC280处理细胞后，MKN45细胞中的GSK3β和E-钙黏着蛋白水平升高。相反，总c-MET，磷酸化c-MET，β-catenin，Wnt /β-catenin下游靶基因（c-MYC，CCND1），血管生成标记（CD31）和EMT标记（SNAIL）的水平降低。但是，这些药物对MKN28细胞无活性。共聚焦显微镜分析MKN45细胞上内源性β-catenin的细胞分布，显示了膜状染色模式。卡马替尼处理20小时后，膜状β-连环蛋白高度减少。出人意料的是，用卡马替尼处理MKN45细胞会导致细胞大小增加。在哺乳动物细胞中，当细胞周期进程受阻时，细胞大小会增加。INC280可通过降解胞质β-catenin诱导凋亡和细胞周期停滞。现在卡马替尼还是比较建议购买的，更多详情可咨询下方微信。