克唑替尼(crizotinib)克服一代EGFR-TKI耐药性的能力

　　尽管EGF受体酪氨酸激酶抑制剂（EGFR-TKI）已显示出对EGFR突变型肺癌的显著作用，但患者最终还是通过多种机制产生耐药性。因此，我们评估了与Met抑制剂克唑替尼（crizotinib）和新一代EGFR-TKI联合治疗克服对第一代EGFR-TKI的耐药性的能力。

　　通过守卫EGFR-T790M突变，Met扩增和HGF过表达而使对EGFR-TKIs产生抗性的肺癌细胞系，并用克唑替尼和新一代EGFR-TKI处理具有这些细胞诱导的肿瘤的小鼠。

　　结果：

　　新一代EGFR-TKI抑制了含有网守EGFR-T790M突变的肺癌细胞的生长，但不抑制具有Met扩增或HGF过表达的细胞的生长。相比之下，克唑替尼加阿法替尼或WZ4002的联合疗法对所有三种类型的细胞均有效，可抑制EGFR和Met磷酸化及其下游分子。克唑替尼联合阿法替尼或WZ4002可以有效抑制由这些肺癌细胞系诱导的小鼠肿瘤的生长。但是，高剂量克唑替尼和阿法替尼的组合（而非WZ4002）引发严重的不良事件。

　　我们的结果表明，克唑替尼和新一代EGFR-TKI对突变型EGFR和Met的双重阻断可能有望克服对可逆EGFR-TKIs的耐药性，但临床上需要仔细评估。

　　已经进行了许多尝试来克服难治性对可逆EGFR-TKIs的耐药性并具有EGFR激活突变。尽管不可逆的EGFR-TKIs（例如afatinib）已在EGFR-TKI难治性肺癌的临床试验中进行了测试，但使用此类药物进行单一疗法已显示出最小的益处，且具有严重的不良反应。在EGFR突变型肺癌患者中，26-40％的患者具有高HGF表达和EGFR-T790M二级突变的肿瘤，5-33％的患者具有Met基因扩增和EGFR-T790M二级突变的肿瘤，4-7％的患者具有Het表达高HGF表达和Met基因扩增，这表明HGF / Met和所述的那双重靶向EGFR-T790M突变可以克服对EGFR-TKI的耐药。

　　HGF最初被鉴定为肝细胞有丝分裂原，自那以后已被证明具有多效生物活性。HGF及其受体Met在各种类型的癌细胞中以不同的水平表达。许多肺癌细胞表达Met，这些细胞和微环境中的其他细胞表达Met配体，表明这些受体和配体调节癌细胞对微环境中分子靶向药物的敏感性。

　　EGFR-TKI耐药性肿瘤对单一疗法缺乏应答可能是由耐药机制的异质性引起的。因此，我们评估了克服由EGFR和/或Met信号转导引起的对多种药物的耐药性而不会引起严重不良影响的方法。在这里，我们重点研究了克唑替尼作为Met抑制剂。尽管已被美国食品药品监督管理局批准为ALK抑制剂，但发现crizotinib是有效的Met抑制剂，野生型c-Met的IC50为4 nM。此外，该药物在临床上是安全的，表明它可能是克服HGF-Met轴诱导的对可逆EGFR-TKIs耐药性的候选药物。

　　在临床前模型中，HGF / Met和突变型EGFR的双重阻断被证明可以克服由EGFR-T790M突变和Met基因扩增引起的对EGFR-TKI的耐药性。我们扩展了这些发现，表明crizotinib加afatinib或WZ4002可以克服自分泌和旁分泌系统中HGF过表达引起的EGFR-TKI，以及由关守EGFR-T790M突变和Met引起的耐药性基因扩增。因此，HGF / Met和突变型EGFR的双重阻断可克服对EGFR-TKI的同时耐药性。高剂量克唑替尼和新一代EGFR-TKI的结合表现出最强的抗肿瘤作用，在体内降低了肿瘤的增殖并增加了肿瘤的细胞凋亡，这表明突变体EGFR和Met的完全双重阻断可以克服对EGFR-T的耐药性TKI。

　　重要的是，当高剂量的克唑替尼和阿法替尼联合使用时，我们观察到了严重的毒性，例如肠粘膜损伤和体重减轻。当WZ4002与克唑替尼组合使用时，未观察到这些致命毒性，这表明阿法替尼而非WZ4002抑制了在肠粘膜中表达的野生型EGFR。此外，这些发现表明，在临床试验中应结合靶向EGFR和Met的药物仔细评估不良反应。

　　已经提出了几种策略来克服对可逆性EGFR-TKI的抵抗力，包括用afatinib，抗EGFR抗体，Hsp90抑制剂，PI3K / mTOR抑制剂和突变体选择性EGFR-TKIs 进行治疗。其中，突变选择性EGFR-TKIs不仅对具有exon19缺失和L858R突变的肿瘤具有活性，而且对具有T790M抗性突变的肿瘤也具有活性。此外，这些药物的毒性可能不如传统的EGFR-TKI，因为它们靶向仅携带某些特定突变的EGFR。这类抑制剂在可逆EGFR-TKIs变得难治的EGFR突变型肺癌患者中需要进一步的临床开发。

　　总之，我们发现克唑替尼联合新一代EGFR-TKI可能克服了肺肿瘤对可逆EGFR-TKI的多重耐药性。这些药物可通过阻断突变EGFR和Met信号传导来抑制肿瘤增殖并促进肿瘤细胞凋亡。这些发现表明用克唑替尼加新一代EGFR-TKI，尤其是对突变EGFR选择性的新一代治疗，可能会通过突变EGFR和/或HGF / Met途径对EGFR-TKIs产生抗药性，从而在肺癌中取得更成功的结果。微信扫描下方二维码了解更多：