INC280卡马替尼服用后恢复厄洛替尼敏感性

　　我们评估了先前评估厄洛替尼敏感性和HGF依赖性厄洛替尼耐药性的5种NSCLC细胞系中卡马替尼的活性。其中包括3个EGFR突变细胞系，1个Kirsten大鼠肉瘤病毒癌基因（KRAS）突变细胞系（H358）和1个EGFR和KRAS野生型细胞系（H1666）。作为单一药物，用卡马替尼（INC280）进行的治疗显示出最小的生长抑制作用，且药物浓度在10μM或更高时引起50％抑制（IC50）。

　　缺乏单一药物卡马替尼的抗增殖活性表明，在标准生长条件下，这些细胞系不是MET依赖性的，这与在测试的5种细胞系中的4种中观察到的基础MET激酶磷酸化的缺乏一致（ HCC827细胞）。但是，当浓度低至10 nM时，卡马替尼可以有效抑制外源性HGF刺激的MET磷酸化。

　　我们先前证明，外源性HGF的添加可赋予对厄洛替尼敏感的NSCLC细胞系以其他方式的耐药性。为了确定卡马替尼是否能在HGF耐药的细胞系中恢复厄洛替尼的活性，我们评估了卡马替尼在厄洛替尼和HGF共同处理的细胞中的生长抑制活性。作为单药，厄洛替尼在4种对厄洛替尼敏感的细胞系中以剂量和细胞系依赖性方式抑制细胞增殖。

　　带有EGFRT790M抗性突变的H1975细胞对厄洛替尼具有难治性，因此被排除在这些实验之外。当将HGF加入厄洛替尼方案中时，厄洛替尼诱导的生长抑制被取消。用卡马替尼处理可将生长抑制活性恢复到单药厄洛替尼观察到的水平。尽管卡马替尼作为单一药剂在测试剂量（0.1和1.0μM）下对细胞系基本上没有抗增殖作用，但仍足以克服HGF介导的对厄洛替尼的抗性。

　　作为单一药物，厄洛替尼可有效下调EGFR突变及其细胞株HCC827和PC-9中EGFR及其下游信号传导介质的磷酸化，包括停靠蛋白GAB1，AKT和ERK。EGFR/KRAS野生型细胞系H1666对EGFR的抑制主要导致MEK / ERK下调。虽然MET蛋白通常在NSCLC中表达，但我们在细胞系中仅观察到有限的MET磷酸化。唯一的例外是细胞系HCC827，其中观察到了基础磷酸化；但是，它似乎依赖于EGFR，因此用埃洛替尼治疗可消除EGFR磷酸化，也可去除MET磷酸化。

　　用HGF刺激后，在所研究的3种细胞系中阻止了厄洛替尼诱导的信号转导活性抑制。在这种情况下，以0.1μM的剂量进行INC-280处理可逆转此效应，从而有效消除GAB1，AKT和ERK的磷酸化。重要的是，在没有厄洛替尼治疗的细胞系中，卡马替尼不足以敲除信号传导（直接靶向MET磷酸化之外）。此外，通过对caspase-3和PARP的切割评估，在我们的细胞系中，卡马替尼处理恢复了厄洛替尼观察到的细胞毒性。现在卡马替尼的作用也是非常不错，更多详情可咨询下方微信。