INC280卡马替尼对MET-TKIs的耐药机制

　　EGFR抑制作用下对MET-TKIs的耐药机制，我们在EGFR突变的细胞中建立了细胞模型，在该模型中，将MET-TKIs 卡马替尼（INC280）或克唑替尼联合厄洛替尼治疗了耐厄洛替尼的MET扩增细胞克隆建立顺序耐药细胞系。用递增剂量的卡马替尼（0–12 nM）或克唑替尼（0–1 μM）和5μM厄洛替尼联合治疗耐厄洛替尼，MET扩增的HCC827ER克隆。治疗4个月后达到了对最高MET-TKI浓度的抗性。除非另有说明，否则将抗性细胞保持在具有EGFR和MET抑制剂的培养基中。

　　第二天将细胞以5,000个细胞孔的密度接种在96孔板上，并在第二天用指定的药物进行四次重复处理。暴露72小时后，根据制造商的规程，使用CellTiter 96非放射性细胞水增殖测定测量细胞活力。我们通过逐步增加剂量的MET-TKIs 卡马替尼或克唑替尼与厄洛替尼的组合治疗，在三个不同的MET扩增的，耐埃洛替尼的HCC827ER细胞克隆（3PAR，8PAR和12PAR）中建立了MET-TKI耐药性。成立的单细胞衍生的克隆MET-TKI电阻MET-扩增的HCC827ER细胞以排除先前存在的抗性细胞群。这产生总共六个顺序的抗性细胞系，对埃洛替尼和MET-TKI的组合具有抗性。

　　耐药细胞系称为3CRR，8CRR，12CRR，3CAR，8CAR和12CAR，数字分别指原始的亲本HCC827ER克隆，而CRR和CAR分别对克唑替尼或卡马替尼耐药。与亲本细胞系相比，在达到最高MET-TKI浓度时，耐药细胞系对MET和EGFR的联合抑制不敏感。在建立厄洛替尼耐药性期间获得的MET的扩增拷贝数保留在所有耐药细胞系中。

　　此外，MET-TKI耐药细胞保留了最初的致敏性EGFRdel19突变，该突变存在于厄洛替尼耐药性发展之前的HCC827细胞中。METmRNA在所有耐药细胞系中均有表达，但在3CRR，8CRR，8CAR和12CRR中表达降低。在所有抗性细胞系中也检测到MET蛋白表达，但与亲代细胞相比，MET未被磷酸化。现在卡马替尼的作用也是非常不错，更多详情可咨询下方微信。