胃癌与遗传易感性有关。在我们对胃癌患者的RNA测序研究中，胃癌中Runt相关转录因子3（RUNX3）的表达明显下调。我们显示出RUNX3水平降低与c-MET显着相关（r = − 0.4216，P =0.0130）。另外，c-MET表达是胃癌靶向治疗的候选者。因此，在本研究中，评估了c-MET抑制剂卡马替尼（INC280）对c-MET扩增阳性或阴性的胃癌细胞的抗癌作用。
结果：
卡马替尼（INC280）处理可抑制c-MET扩增的MKN45（RUNX3阳性）和SNU620（RUNX3阴性）弥漫型细胞的生长。然后，INC280在MKN45细胞中显示出最高的抑制率和凋亡率，而IC50值最低，而在c-MET还原的MKN28（肠型）细胞中则没有。我们还显示，INC280抑制MKN45细胞中的WNT信号通路和SNAIL表达。数据表明，INC280可用作预防或治疗c-MET扩增阳性的弥漫性胃癌的治疗剂。
INC280由诺华提供。在用于所有体外研究之前，将化合物以10 mmol / L的浓度溶于二甲基亚砜中。从34例患者中获得的GC和相邻的正常组织已获得哈林大学圣心医院伦理委员会（2015-I078）的批准，并被选为RNA-seq的发现队列。
使用RNA序列对34名受试者进行了遗传变异研究，我们鉴定了差异表达的基因，例如MET和RUNX3。我们发现RUNX3的下调与MET过表达之间存在相关性，而只有一个（SNU620）细胞显示出相关模式。RUNX3的低表达与分化差（52.9％;P <0.001），Ki-67的高表达（79.4％;P <0.001），弥漫型组织学（41.2％;P <0.001）和复发（100）显着相关。 ％；P <0.001）。OS分析比较了MET或RUNX3基因型GC的贡献，无统计学差异（对数秩P = 0.1346和P = 0.4200;）。在这项研究中，MET扩增与不良预后无关。可能是因为在2–20％的GC患者中存在MET扩增，但是在过表达的MET中只有7％的肿瘤过度表达了p-MET。p-MET与不良预后显着相关。
为了研究卡马替尼对有或没有RUNX3的c-MET扩增细胞的影响，在GC细胞中评估了c-MET和RUNX3蛋白的表达。c-MET和RUNX3蛋白在SNU5和MKN45细胞中表达。有趣的是，p-MET扩增的胃癌细胞系属于弥散型（图2）。1个b）。我们测试了INC280对MKN28（肠型），SNU620（RUNX3阴性弥漫型）和MKN45（RUNX3阳性弥漫型）细胞的剂量依赖性抑制作用。用不同浓度的INC280处理细胞48小时，并通过使用MTS分析评估细胞活力来确定最佳剂量。INC280的处理在c-MET扩增的SNU620和MKN45细胞中以剂量依赖性方式降低了细胞活力，但在c-MET还原的MKN28细胞中未降低细胞活力（n = 3）。使用非线性回归分析[IC50 = 1.7 nM（MKN45）或2.4 nM（SNU620）]确定INC280的IC50值。
为了确定卡马替尼对MKN28和MKN45细胞的抑制作用，使用INC280的各自IC50值，通过伤口愈合试验检查了细胞迁移。用INC280处理的c-MET扩增的MKN45细胞的伤口间隙明显比处理的c-MET还原的MKN28细胞的伤口间隙宽。INC280对c-MET扩增的细胞系显示出抑制作用。
为了评估卡马替尼对MKN28，SNU620和MKN45细胞中细胞死亡的影响，通过用膜联蛋白V-APC / PI染色，然后进行流式细胞术检查凋亡。细胞用膜联蛋白V-APC和PI染色，分别评估早期凋亡和晚期凋亡细胞群。INC280在SNU620和MKN45细胞中显示出最佳的细胞死亡率，但在MKN28细胞中则没有。暴露于INC280 48小时后，凋亡细胞的百分比分别为22.59％和23.56±1.08％。相反，这些药物对表达低水平的c-MET的MKN28细胞没有活性。微信扫描下方二维码：
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