达克替尼Dacomitinib在体外抑制头颈鳞状细胞癌细胞系生长的有效性

　　目前，不可逆的泛erbb抑制剂达克替尼(dacomitinib)正在进行III期临床试验，用于治疗肺癌患者，并显示出了治疗这种恶性肿瘤的良好活性。我们试图比较达克替尼与西妥昔单抗(EGFR抑制剂，目前FDA批准的唯一用于头颈部鳞状细胞癌的靶向治疗)和厄洛替尼(EGFR小分子抑制剂，尚未FDA批准用于头颈部鳞状细胞癌)的效果。我们提供的证据表明使用达克替尼这样的泛her抑制剂治疗比使用EGFR特异性抑制剂西妥昔单抗和厄洛替尼更有效。　　

　　我们的数据证明了达克替尼在体外抑制头颈鳞状细胞癌细胞系生长的有效性。我们的数据显示，用西妥昔单抗表现出显著生长抑制的细胞系在用达克替尼时也表现出显著的生长抑制，这至少说明了达克替尼与西妥昔单抗相比缺乏劣效性。临床感兴趣的是，3/27细胞株(11%的小组)在使用西妥昔单抗时经历了超过90%的生长抑制，这让人想起在接受西妥昔单抗治疗的患者中观察到的10%的缓解率。三种细胞系对达克替尼均有较高的敏感性，IC50值均小于10nM。　　

　　如果这一临床前观察结果适用于临床，我们可以预测那些对西妥昔单抗有反应的患者也会对达克替尼有反应。在头颈部鳞状细胞癌患者中测试口服达克替尼将补充已经上市的静脉抗体西妥昔单抗，因为它提供了作为替代或可能的补充治疗的潜力。口服药物可以避免患者频繁接受静脉治疗，不需要适当的设施来管理治疗，固有的经济资源以及静脉抗体治疗固有的严重副作用，如输液反应。下一步将是评估达克替尼在头颈部鳞状细胞癌动物模型中的有效性。　

　　我们的数据还表明，PanHerTKI(达克替尼)对EGFR抑制反应的改善不仅仅与达克替尼是一种小分子抑制剂而西妥昔单抗是一种抗体这一事实有关。在小分子抑制剂和抗体之间有真正的药理学差异。抗体(约150kDa)比小分子抑制剂(50kDa)大得多。例如，在脑癌中，抗体无法通过血脑屏障，因此在脑癌患者中使用这种疗法，如鞘内或肿瘤内给药必须考虑。　　

　　小分子抑制剂口服给药，其半衰期往往比抗体短得多。更重要的是，抗体和小分子抑制剂通常针对蛋白质的不同部分。西妥昔单抗可与EGFR外结构域的配体结合结构域结合，而小分子抑制剂吉非替尼和厄洛替尼可作为ATP类似物，在催化结构域内与ATP结合竞争，从而特异性抑制EGFR磷酸化。即使我们测试了EGFR特异性小分子TKI(厄洛替尼)，反应细胞系的数量并没有增加。　　

　　仍然只有25%的小组被认为对EGFR抑制有反应。此外，所有用厄洛替尼和达克替尼测试的细胞系都显示出对达克替尼更大的敏感性，这进一步证明panher抑制剂可能比使用EGFR特异性治疗更好。需要进行进一步的体内比较，以评估毒性和特异性。　　

　　该项目的目标是为达克替尼在头颈癌中的发展提供临床前基础。为此，我们选择了目前仅获批准的EGFR药物西妥昔单抗进行比较。此前，另一项研究比较了拉帕替尼(一种小分子酪氨酸激酶抑制剂)和曲妥珠单抗(FDA用于治疗乳腺癌的抗体)。这项临床前研究为拉帕替尼被批准用于乳腺癌治疗提供了支持。最近，我们实验室小组提供了在曲妥珠单抗和拉帕替尼耐药的HER2扩增乳腺癌细胞株中使用达克替尼的临床前合理性。　　

　　敏感性截止值为1uM，用于区分敏感的HNSCC细胞系。这个分界线类似于乳腺细胞系面板[23]中用来区分敏感细胞系的分界线。通过对药物的酶学分析发现，1uM是开始出现脱靶或非特异性作用的部位。因此，1uM以下的抗增殖作用更可能是由于药物对其设计的分子靶标的特异性作用。此外，I期研究的PK数据表明，达克替尼的最大血浆浓度在200-300nM之间，这在我们的灵敏度截止范围内。然而，值得注意的是，有许多因素使体外药物浓度难以推广到临床。因此，任何对体外敏感性的切断都是有些武断的。　　

　　在一些西妥昔单抗抑制生长低于50%的头颈鳞状细胞癌细胞系中，达克替尼的IC50g值小于100nM。在最近的一期研究中，达克替尼的血浆最大浓度在200nM-300nM之间，因此我们本研究中使用100nM的达克替尼进行生化分析时，就在这个范围内，在保守方面存在[24]的错误。我们还证明，在EGFR配体存在的情况下，西妥昔单抗不会抑制参与细胞生长的通路，而达克替尼则显著抑制这些通路。在临床中，头颈部鳞状细胞癌患者中高水平的EGFR配体如TGF与较差的患者预后相关。因此，该化合物可能具有治疗头颈部鳞状细胞癌患者的潜力，特别是那些在接受西妥昔单抗治疗后病情开始恶化或在初始反应后最终出现耐药性的患者。　　

　　对达克替尼和西妥昔单抗的耐药性似乎不是由配体独立信号通路介导的。EGFRviii是EGFR的一种截短形式，与致瘤性和治疗耐药性有关。由于EGFRviii是组成性活性的，而不管是否存在配体]，因此可能假设EGFRviii介导抗性的细胞比敏感的细胞具有更高水平的基础磷酸化EGFR。在我们的细胞系中，我们观察到相反的情况；达克替尼敏感细胞的基础磷酸化水平明显高于耐药细胞系。　　

　　此外，可以预测，相比敏感细胞系，耐药细胞系中EGFR基线磷酸化水平的增加对EGF刺激的响应较小。我们也没有观察到这种趋势。EGFR配体(EGF)的加入增加了敏感细胞系和耐药细胞系中EGFR的磷酸化。这些观察表明，尽管在开发ad测试抑制剂时必须考虑到截短受体的构象差异，但非配体依赖性EGFRviii信号通路可能与EGFR治疗耐药性无关。　

　　我们从人类头颈部癌症肿瘤标本中生成的细胞系标本显示出与头颈部鳞状细胞癌活检和肿瘤标本类似的生物标志物轮廓，这一点并不奇怪。我们的小组缺乏第19和21个外显子EGFR突变，K-RAS和PI3K突变频率较低，这与HNSCC患者和的分子特征一致。这为我们的研究小组是进行头颈癌临床前研究的合适研究模型提供了支持。具有任一突变的两个细胞系是对达克替尼最不敏感的细胞系。　　

　　这些EGFR下游信号分子的激活突变表明，为了抑制这些细胞系的生长，可能需要抑制突变成分的下游效应因子。该策略目前正在进行一项临床试验，研究一种MEK抑制剂对RAF癌基因发生激活突变的患者的有效性，RAF癌基因与K-RAS一样是EGFR信号的下游效应因子。然而，此类突变在头颈部鳞状细胞癌中的预测价值仍然有限，因为没有临床研究调查有或没有突变的头颈部鳞状细胞癌患者接受EGFR指导治疗的结果。　　

　　在其他组织学中，这种突变的预测价值一直不一致。结直肠癌中的K-RAS突变已被临床证明使肿瘤对egfr靶向抗体西妥昔单抗和帕尼单抗不敏感，而egfr靶向小分子厄洛替尼已获得FDA批准用于胰腺癌的治疗，其中超过70-90%具有K-RAS突变。针对EGFR突变效应因子和下游分子的抑制剂的进一步研究可能阐明头颈鳞状细胞癌细胞对EGFR靶向治疗具有或获得耐药性的机制。详情请扫码咨询：