如何克服达拉非尼(dabrafenib)耐药

　　BRAF抑制剂用于治疗转移性黑色素瘤的临床应用受到耐药性发展的限制。在这项研究中，我们调查了共同靶向 MAPK 和 PI3K-AKT 通路是否可以防止耐药性的出现或提供额外的体外生长抑制作用。

　　BRAF 抑制剂 (BRAFi) 达拉非尼（dabrafenib）和 GSK2141795B (AKTi) 在一组 23 种 BRAF 突变黑色素瘤细胞系中的抗肿瘤作用通过基于 ATP 的发光测定对生长抑制、细胞周期和流式细胞凋亡进行评估细胞计数和蛋白质印迹的细胞信号传导。此外，我们通过长期培养研究了通过将 AKTi 与达拉非尼和/或 MEK 抑制剂 (MEKi) 曲美替尼组合来延迟或逆转耐药性或实现进一步生长抑制的可能性。

　　结果

　　超过 40% 的细胞系，包括 PTEN-/- 和 AKT 突变体显示出对 AKTi 的敏感性（IC50 < 1.5 μM）。达拉非尼和 AKTi 的组合在大多数细胞系中协同增强生长抑制，IC50 > 5 nM 达拉非尼。组合治疗仅在对 AKTi 敏感的细胞系中诱导细胞凋亡。在 PTEN-/- 细胞系的长期培养中，使用 MAPK 抑制剂、达拉非尼和曲美替尼以及 AKTi 的组合治疗显着延迟了耐药性的出现。此外，与添加 AKTi 相比，从一开始就将 AKTi 与 MAPK 抑制剂组合在该特定细胞系中对 MAPK 抑制剂产生抗性时提供了更好的生长抑制效果。

　　结论

　　AKTi 联合基于 BRAFi 的治疗可能有益于携带 BRAF 突变，尤其是 PTEN 缺失或 AKT 突变的肿瘤患者。

　　BRAF 抑制剂，如威罗非尼或达拉非尼（dabrafenib），可有效阻断突变 BRAFV600蛋白下游的信号传导，这最初导致黑色素瘤细胞的显着生长抑制和临床中肿瘤消退的高频率。然而，这些药物的临床使用受到获得性耐药性发展的限制。越来越多的数据表明，单一的耐药机制并不能解释对 BRAF 抑制剂的获得性耐药——而是描述了各种各样的突变和信号改变。最佳表征的核心通路抗性机制是重新激活 MAPK 通路。这可以通过激活NRAS 中的突变、扩增BRAFV600基因或通过选择性剪接截断 BRAFV600蛋白来实现，导致由于二聚化增加而缺乏药物抑制。激活MEK 中的突变与丝氨酸/苏氨酸MAP激酶激酶激酶（MAP3K8，COT / TPL2）的过表达也已经在BRAF抑制剂抗性中描述。这些 MAPK 重新激活抗性机制的一个共同特征是它们绕过了 BRAF 的抑制，从而恢复了 ERK 的激活。因此，在 MEK 水平上阻断下游 MAPK 通路，单独或与 BRAF 抑制联合可能是克服此类耐药性的一种策略，解决这一问题的临床试验已经在进行中。在转移性黑色素瘤患者的前期治疗中，越来越多地使用双 BRAF 和 MEK 抑制剂的获得性耐药很可能导致药物逃逸期间对 MAPK 独立途径的依赖增加。在这种情况下，通过 PI3K-AKT 通路增强信号可能可以恢复致癌信号。PI3K-AKT 通路的过度活性可以通过激活信号分子中的突变、磷酸酶和张力蛋白同源物 (PTEN) 的缺失或受体酪氨酸激酶 (RTK)（如血小板衍生生长因子）的过度表达或过度激活来实现β (PDGFRβ) ，胰岛素样生长因子受体-1 (IGFR-1)或表皮生长因子受体 (EGFR)。

　　鉴于 MAPK 和 PI3K-AKT 通路是黑色素瘤中的主要信号通路，并且可以通过增强 PI3K-AKT 通路的信号传导来介导对 BRAF 抑制剂的 MAPK 非依赖性抗性，将 BRAF 抑制剂与的PI3K-AKT途径的抑制剂来实现协同的抗肿瘤活性。这进一步得到了以下事实的支持：这两条通路连接在一个复杂的网络中，具有广泛的串扰和在不同级别运行的反馈回路。

　　在本研究中，我们检验了将最近已被美国食品和药物管理局批准用于临床的 BRAF 抑制剂达拉非尼（dabrafenib）与新型 AKT 抑制剂工具化合物 GSK2141795B (AKTi) 相结合的假设，后者是临床上的类似物。经测试的 AKT 抑制剂 GSK2141795，在BRAFV600 中具有优越的抗肿瘤作用突变黑色素瘤细胞系与单药达拉非尼相比。

　　此外，我们研究了在对 MAPK 抑制剂耐药时添加 AKTi 是否可以提供二次反应，以及达拉非尼、曲美替尼和 AKTi 的前期组合是否可以延迟耐药性的出现。在这里，我们提供的证据表明，dabrafenib 和 AKTi 的组合在大多数测试的细胞系中协同抑制增殖。此外，我们表明 AKTi 可以延迟对 MAPK 抑制剂的耐药性的出现，并且还在本研究中测试的唯一 AKTi 敏感细胞系中对 MAPK 抑制剂组合的耐药性提供进一步的生长抑制。微信扫描下方二维码了解更多：