泰菲乐/达拉非尼副作用肝损伤

　　受体相互作用蛋白 (RIP)3 是坏死性凋亡的关键调节因子，已被证明与各种疾病有关，表明其抑制剂在临床上很有前景。然而，迄今为止报道的 RIP3 抑制剂很少。B-RafV600E抑制剂是用于转移性黑色素瘤治疗的重要抗癌药物类别。在本研究中，我们发现 6 种 B-Raf 抑制剂可以在体外抑制 RIP3 酶活性。 其中，达拉非尼（泰菲乐）对 RIP3 的抑制作用最强，这是通过其与酶的 ATP 竞争性结合实现的。达拉非尼对 RIP3 的抑制作用高于 RIP1、RIP2 和 RIP5。此外，只有达拉非尼从由坏死性凋亡诱导的组合，即肿瘤坏死因子 (TNF)α诱导的 RIP3 介导的坏死性凋亡中拯救细胞, TNF 相关凋亡诱导配体或 Fas 配体加 Smac 模拟物和半胱天冬酶抑制剂 z-VAD。

　　达拉非尼降低了 RIP3 介导的混合谱系激酶结构域样蛋白 (MLKL) 的 Ser358 磷酸化，并破坏了 RIP3 和 MLKL 之间的相互作用。值得注意的是，达拉非尼的 RIP3 抑制似乎与其 B-Raf 抑制无关。进一步揭示达拉非尼可预防对乙酰氨基酚诱导的正常人肝细胞坏死，这被认为是由 RIP3 介导的。在对乙酰氨基酚过量的小鼠模型中，发现达拉非尼明显缓解了对乙酰氨基酚引起的肝损伤。结果表明抗癌B-RafV600E抑制剂达拉非尼是一种 RIP3 抑制剂，可作为探索 RIP3 生物学的利器，并作为 RIP3 涉及的坏死性凋亡相关疾病（如对乙酰氨基酚引起的肝损伤）的潜在预防或治疗剂。

　　在本研究中，我们建立了非放射性 RIP3 激酶测定，并发现达拉非尼（泰菲乐）在八种测试的 Raf 抑制剂中引发了对 RIP3 的最有效抑制。通过 ATP 与酶蛋白达拉非尼 的竞争性结合，相对于其他 RIP 家族成员，以高选择性抑制 RIP3。达拉非尼显然从 RIP3 介导的坏死性凋亡中拯救了细胞，这与其 B-Raf 抑制作用无关。此外，达拉非尼减轻了对乙酰氨基酚诱导的 RIP3 介导的人肝细胞或小鼠肝组织坏死性损伤。

　　已证明 RIP3 介导的坏死性凋亡与多种病理状态有关。RIP3 敲除或沉默可以逆转或预防其中一些疾病或损伤，这表明 RIP3 抑制剂在临床中具有潜在的预防或治疗用途。目前仅报道了两种 RIP3 抑制剂（GSK'843 和 GSK'872），但这两种抑制剂只是用来探讨RIP3在TLR3诱导的坏死中的作用；没有显示关于它们对 RIP3 相关疾病或损伤的预防或治疗作用的数据。因此，达拉非尼是第一个报道的小分子 RIP3 抑制剂，在 RIP3 介导的病理状态，即对乙酰氨基酚引起的肝损伤中显示出预防或治疗作用。达拉非尼已在临床上用于其他疾病的治疗，表明其对人体的安全性是可以接受的。这显然提高了其预防或治疗临床用途的可能性，用于 RIP3 涉及的疾病或损伤，包括对乙酰氨基酚过量的肝毒性。

　　尽管 RIP1 和 RIP3 蛋白具有相似的一级序列，而 RIP1、RIP3 和 B-Raf 蛋白具有相似的构象，我们的数据显示 RIP1 抑制剂 necrostatin-1 不抑制 RIP3。测试的 B-Raf 抑制剂也表现出不同的 RIP3 抑制活性，这显然与其 Raf 抑制活性无关。达拉非尼对 RIP3 和 Raf 激酶均表现出强效抑制作用。此外，我们的数据显示，达拉非尼抑制 RIP3，与其对 B-Raf 家族成员的影响无关。因此，基于达拉非尼的结构，仔细的构效关系研究有助于区分有助于抑制 RIP3 的部分和有助于抑制 Raf 的部分。该结果可能为未来开发高选择性RIP3或B-Raf抑制剂奠定重要基础。选择性 RIP3 抑制剂，除了它们在 RIP3 相关病理状态中的潜在应用，

　　此外，达拉非尼（泰菲乐）和 vemurafenib 最近都被批准用于治疗携带 B-RafV600E的转移性黑色素瘤。达拉非尼对 B-RafV600E 的抑制作用是威罗菲尼的 39 倍。然而，达拉非尼的临床治疗效果稍弱，导致皮肤鳞状细胞癌的发生率较低（发生率：达拉非尼III 期试验为6%，而 vemurafenib III期试验为26%），这是 B-Raf 的常见副作用V600E抑制剂。根据发光测定法测定，达拉非尼对 RIP3 的抑制也比 vemurafenib 强 27 倍。两种 B-RafV600E抑制剂之间的这些差异似乎表明 RIP3 抑制可能在其治疗效果和毒性中起作用，这一点值得澄清。在这方面，B-Raf 针对 RIP3 的选择性抑制剂也可能有帮助。微信扫描下方二维码了解更多：