推测PIK3CA扩增是卡马替尼Tabrecta获得性耐药机制

　　尽管连续将EBC-CR3细胞系(来源于EBC-CR1细胞)暴露于卡马替尼而不是EGFR-TKI中，但在细胞活力测定中导致了对afatinib的敏感性丧失。Western blot显示，afatinib处理后，EBC-CR3完全阻断了EGFR或MET激活，但AKT持续磷酸化。我们通过qRT PCR和Sanger测序来研究egfr依赖性对afatinib耐药的机制。

　　我们发现在EBC-CR3细胞中PIK3CA mRNA表达增加，基因拷贝数扩增，这与我们在其他细胞系中观察到的不同；然而，我们在PIK3CA中没有发现任何热点突变(数据未显示)。

　　PIK3CA扩增在肺癌特别是鳞癌中频繁出现，可能起致病作用；因此我们推测PIK3CA扩增是卡马替尼获得性耐药机制。为了证实这一假设，我们测试了BYL719在EBC-CR3细胞中抑制PIK3CA的有效性，因为BYL719的分子靶标此前已经报道过。

　　结果，我们用BYL719单次处理后出现耐药性；然而，同时过表达EGFR的细胞在存在afatinib的情况下对BYL719敏感(BYL719的IC50， 140.84±19.65 nmol/L)。虽然BYL719和afatinib联合治疗对EBC-1和EBC-CR2细胞有耐药性，但对EBC-CR1细胞有相加效应。

　　此外，尽管MET信号持续存在，但BYL719与afatinib联合有效抑制了AKT的磷酸化和RAS/MAPK通路的失活(数据未显示)。联合处理不完全抑制AKT在EBC-1和-CR2上的磷酸化。

　　虽然在EBCCR3细胞中可能形成一个或多个菌落，但在其他菌落中除了PIK3CA扩增外没有其他基因修饰。这些结果表明，PIK3CA野生型扩增可能是卡马替尼Tabrecta耐药癌症中对EGFR-TKI耐药的另一种机制；然而，联合治疗有效地克服了对TKIs的抵抗，以独立于met的方式存在额外的基因改变。详情请扫码咨询：