奈拉替尼(Niratinib)可抑制致癌基因并杀死胰腺和血癌细胞

　　先前的研究表明，不可逆的 ERBB1/2/4 抑制剂奈拉替尼（Niratinib）导致质膜相关突变 K-RAS 定位在细胞内囊泡中，伴随着其降解。在此，我们发现奈拉替尼与化学性质不同的不可逆 ERBB1/2/4 抑制剂阿法替尼相互作用以降低 ERBB1、ERBB2、K-RAS 和 N-RAS 的表达；这与胰腺肿瘤细胞的细胞杀伤作用大于累加性有关。敲低 Beclin1、ATG16L1、Rubicon 或组织蛋白酶 B 显着降低奈拉替尼降低 ERBB1 和 K-RAS 表达的能力，并导致肿瘤细胞死亡。ATM-AMPK 的敲低抑制了囊泡的形成，组织蛋白酶 B-AIF 的敲低显着降低了奈拉替尼的致死率。PKG 磷酸化 K-RAS 和 HMG CoA 还原酶抑制剂减少 K-RAS 法呢基化，这两者都从质膜中去除 K-RAS，消除其活性。奈拉替尼与 PKG 激活剂西地那非和 HMG CoA 还原酶抑制剂阿托伐他汀相互作用，以进一步降低 K-RAS 表达，并进一步增强细胞杀伤。Neratinib 也是 Ste20 激酶家族抑制剂，在癌细胞和缺乏 ERBB1/2/4 的造血癌细胞中，它降低了 K-RAS 表达和 MST1/3/4/Ezrin 的磷酸化约 30%。奈拉替尼使 LATS1 磷酸化以及 YAP 和 TAZ 的磷酸化也增加了约 30%，导致大部分 YAP 转移到细胞质中并降低 YAP/TAZ 蛋白水平。通过敲低 YAP，奈拉替尼的致死率有所提高。奈拉替尼，以 Rubicon 依赖的方式，降低 PAK1 磷酸化及其底物 Merlin 的磷酸化。我们的数据表明，奈拉替尼协同抑制突变 K-RAS 和 YAP 功能以杀死胰腺肿瘤细胞。

　　我们之前曾在表达突变活性 ERBB1 的 H1975 NSCLC 细胞中发表文章，不可逆 ERBB1/2/4 抑制剂奈拉替尼（Niratinib）比另一种不可逆 ERBB1/2/4 抑制剂阿法替尼具有更大的下调 ERBB1 表达的潜力。奈拉替尼（Niratinib）比阿法替尼显着降低其他肿瘤细胞类型中 ERBB1、ERBB2、K-RAS 和 N-RAS 的蛋白质水平；尽管阿法替尼，大概通过 ERBB1/2/4 起作用可以下调受体。与阿法替尼不同，奈拉替尼不仅抑制 ERBB1/2/4 受体酪氨酸激酶家族，还抑制丝氨酸/苏氨酸激酶 Ste20 家族的多个成员，包括 MST3 和 MST4。在实体瘤细胞和血癌细胞中，奈拉替尼（Niratinib）阻止 MST3/4 自磷酸化和下游底物 Ezrin 的磷酸化。在两种类型的肿瘤细胞中，奈拉替尼都降低了 K-RAS 的表达。其他人最近也表明，奈拉替尼和阿法替尼在实体瘤细胞系中可以降低 ERBB1/2/3 的表达。

　　激酶 Sterile 20 (Ste20) 是出芽酵母中信息素反应途径的一个组成部分。Ste20 的几种哺乳动物同源物已被确定，包括 PAK、GCN 激酶家族 (MAP4K) 和 MST1/2/3/4。哺乳动物不育二十样激酶 MST1/2 是 Hippo 通路的核心信号成分。河马通过调节细胞凋亡和细胞增殖来控制器官大小和组织稳态。简单地说，MST1/2 磷酸化并激活大肿瘤抑制因子 LATS1/2，以及与核 Dbf2 相关的 NDR1/2 激酶。在此过程中必不可少的是 Mps one 结合剂家族的支架蛋白 MOB1、MOB4 和 SAV1 。其他支架蛋白如 RASSF1A 和 Salvador 也可以通过形成 SARAH 结构域依赖性复合物来激活 MST1/2 。例如，MST1:MOB1 复合物与 MST4:MOB4 复合物的数量会影响通路信号是否促进生长或细胞死亡。奈拉替尼（Niratinib）可抑制 MST1/2 /3/4，但不抑制 LATS1/2 或 NDR1/2；事实上，我们的数据显示它激活了 LATS1/2。激活的 LATS1/2 或 NDR1/2 磷酸化并导致转录共激活因子 Yes 相关蛋白 (YAP) 及其伙伴 TAZ 的细胞质隔离。然后可以泛素化和蛋白水解降解胞质 YAP 和 TAZ。例如需要自噬。YAP 是一种致癌基因，它通过与 TEAD 转录因子家族合作来增强参与细胞增殖的基因的转录；因此，YAP 的失活会促进细胞死亡 。最近，除了 MST1/2 之外，Ste20 样 MAP4K 激酶家族的其他成员也被证明可以激活 LATS1/2 的磷酸化。YAP/TAZ 的规定不需要 MST1/2。敲除 LATS1/2 而不是 MST1/2，会消除 YAP/TAZ 磷酸化 。现在已知 MAP4K1/2/3 和 MAP4K4/6/7 是直接的 LATS1/2 激活激酶。因此，联合删除 MAP4Ks 和 MST1/2，但不是单独的亚组，都可以抑制 LATS1/2 和 YAP/TAZ 的磷酸化，即 MAP4Ks 作为扩展河马通路的组成部分。

　　MAP4K4 家族激酶在 NDR1/2 上游起作用，NDR1/2 和 LATS1/2 激酶磷酸化除 YAP 之外的其他底物。MST1/2/3 磷酸化 T444/T442 上的 NDR1/2，需要支架 MOB1 与 NDR1/2 的结合来支持 S281/S282 上 NDR1/2 的自动磷酸化。NDR1/2的激活可以通过不同的途径介导：蛋白磷酸酶2A的抑制；自抑制片段的突变；和 NDR1/2 的膜靶向。因此，NDR1/2 可以通过不同的信号机制进行调节，包括改变亚细胞分布和磷酸化状态。MAP4Ks 可以作为 NDR1/2 和 LATS1/2 的上游激酶。MAP4K4 可以作为 NDR1/2 激酶作为渗透应激信号传导的一部分发挥作用，并且 MAP4K4 已被确定为无偏激酶组筛选中的 LATS1/2 激酶。进一步的分析表明，MAP4Ks 家族的几个成员可以在 LATS1/2 的上游发挥作用。

　　已经表明致癌 RAS 可以改变 Hippo 通路的信号传导。转录因子 YAP 对肿瘤起始和 K-RAS 成瘾的胰腺癌的生长至关重要。YAP 激活可以绕过胰腺癌中的 K-RAS 依赖性。而且，YAP 还可以替代小鼠肺癌模型中的突变 K-RAS。关于奈拉替尼（Niratinib），YAP 可以介导对靶向突变 K-RAS 信号的药物的耐药性，例如 B-RAF 抑制剂威罗非尼或 MEK1/2/5 抑制剂曲美替尼。在表达突变 K-RAS 的成肌细胞中，YAP 在体外和体内协同促进增殖并防止死亡。微信扫描下方二维码了解更多：