来那替尼/奈拉替尼通过靶向活化肝星状细胞减轻肝纤维化

　　肝纤维化是一种以细胞外基质 (ECM) 过度积累为特征的慢性肝病的常见结果，是全球死亡的主要原因。酪氨酸激酶抑制剂来那替尼（奈拉替尼）是FDA批准用于HER2阳性乳腺癌治疗的人表皮生长因子受体2（HER2）抑制剂；然而，它尚未被评估用于肝纤维化治疗。我们阐明了来那替尼在肝星状细胞 (HSC) 和 CCl4体内模型中的抗纤维化作用-诱发的肝纤维化。HSC 激活是肝纤维化的关键步骤，并且在胶原沉积中起关键作用，因为它主要负责过度的 ECM 产生。在转化生长因子 (TGF-β) 孵育的 LX-2 细胞和培养激活的原代人类 HSC 中评估了来那替尼对 HSC 的影响。体内研究结果表明，来那替尼可抑制 CCl4诱导的炎症反应、HSC 分化和胶原蛋白积累。此外，来那替尼的抗纤维化作用与 HER2 信号通路无关。来那替尼抑制模型中活化 HSC 中 FGF2 的表达和血清 FGF2 水平，表明来那替尼具有抗肝纤维化的治疗效力和应用于其他纤维化疾病的潜力。

　　来那替尼（奈拉替尼）被 FDA 批准用于治疗 HER2 阳性乳腺癌。临床研究报道，来那替尼不仅影响乳腺癌，而且影响非小细胞肺癌、结直肠癌和胆管癌。在这项研究中，我们通过检查来那替尼抑制 HSC 激活的功效，首次评估了来那替尼对肝脏的抗纤维化作用。来那替尼在体外对 HSC 活化显示出有效的抑制作用。为了评估抗纤维化作用，来那替尼口服给药于小鼠与CCl4诱导的肝纤维化，结果显示，在肝纤维化的早期和晚期较强的抗纤维化作用。探索与 HSC 激活相关的信号通路以阐明作用机制。

　　ECM 蛋白的积累是由肝损伤引起的慢性炎症后发生的伤口愈合过程的结果。在过去的几十年里，肝纤维化的管理取得了长足的进步，其中包括饮酒、乙型肝炎病毒 (HBV)、丙型肝炎病毒 (HCV) 和代谢紊乱等多种因素被确定为肝纤维化的重要原因.长期肝纤维化会导致肝硬化、肝功能衰竭、肝细胞癌和死亡.最近，包括抗病毒药物在内的几种药物已被 FDA 批准用于治疗肝纤维化。然而，这些药物仅在某些情况下有用，目前还没有成功的肝脏特异性纤维化疗法。此外，除了刺激血小板生成的 Mulpleta（lusutrombopag）外，没有 FDA 批准的小分子靶向抗纤维化疗法。因此，开发抗纤维化药物对于通过抑制肝纤维化源来逆转晚期纤维化是必不可少的。

　　我们的结果表明，来那替尼（奈拉替尼）通过抑制 HSC 活化，在早期和晚期改善了 CCl4诱导的肝纤维化。aHSCs 是肝纤维化的主要效应细胞，约占产生 ECM 的肌成纤维细胞的90%。HSC活化和除去aHSCs的抑制进行了研究，作为肝纤维化主要方法。在慢性肝病中开发靶向 aHSC 的小分子以提高治疗效果将是一个合乎逻辑的策略。在激酶抑制剂库筛选后，来那替尼被选为对 hpHSCs 和 LX-2 细胞中的纤维化具有有效抑制作用的药物。

　　来那替尼（奈拉替尼）是一种不可逆的泛 HER 酪氨酸激酶抑制剂，最近被 FDA 批准作为 HER2+早期乳腺癌患者的扩展辅助治疗，除腹泻外不会引起严重的不良反应此外，来那替尼通过 EGFR/HER-2 通路在非小细胞肺癌、结直肠癌和胶质母细胞瘤中显示出抗癌作用。几项研究报道，EGFR / HER-2抑制剂通过抑制肝星状细胞的减毒肝纤维化。然而，我们发现活化的 hpHSCs 不表达 HER-2 蛋白。相反，我们发现来那替尼阻断了激活的 HSC 中的 MEK-ERK-CREB 信号传导。此外，FGF2 是 FGF1 亚家族的成员，其在纤维化中的作用尚不清楚。在患有慢性肝病的血清和肝组织中观察到的FGF2水平高，但不存在于正常肝。林等人和 Yu 等人表明 FGF2 诱导胶原蛋白和 α-SMA 的表达，并且 FGF2 的消耗减少了 CCl4诱导的肝纤维化。然而，佐藤松原等人。坚持认为 FGF2 可以改善 BDL 小鼠并抑制 HSC 活化。古等人显示 FGF2 抑制成纤维细胞胶原蛋白的产生和肌成纤维细胞的分化，这表明 FGF2 是促纤维化因子的潜在候选者。在我们的研究中，CCl4处理的小鼠肝脏中FGF2mRNA 和血清 FGF2 的水平增加，aHSC 显示FGF2mRNA的水平增加。

　　体内结果强烈表明来那替尼（奈拉替尼）具有抑制肝纤维化的能力。四氯化碳4是在肝纤维化研究中广泛使用的有毒化学物质，它的作用通过增加自由基的水平。CCl4注射2-3 周后通常会观察到组织学纤维化的第一个症状，并且可以在注射后 4 到 6 周的分子水平上检测到纤维化，具体取决于剂量，在 C57BL/6 小鼠中.我们的结果表明，纤维化标志物（α-SMA和胶原蛋白）在肝纤维化早期显着增加，这些标志物在晚期表达更高。相比之下，晚期炎症细胞因子的表达远低于早期。我们的结果表明，来那替尼治疗可显着改善肝纤维化小鼠的两个阶段，这可以通过肝组织中 α-SMA 表达、胶原沉积和其他纤维化标志物（TIMP-1、PDGFR-β 和 TGF-β）的减少来证实.当我们在与来那替尼/LPS 共同治疗 4 小时后使用分离的原代小鼠库普弗细胞进行额外研究时，小鼠 IL-6 的水平部分受阻，表明来那替尼也可以直接靶向免疫细胞。最近的一项研究表明，来那替尼抑制了 LPS 激活的小鼠巨噬细胞 264.7 中 IL-6、TNF-a 和 IL-1b 的 mRNA 水平。

　　我们的结果表明，来那替尼（奈拉替尼）通过抑制 aHSCs 来改善肝纤维化。此外，这项研究表明，来那替尼的目标是抑制 FGF2，作为缓解 aHSC（肝纤维化的潜在靶点）的新候选药物。微信扫描下方二维码了解更多：