导致舒尼替尼(sutent)耐药的原因

　　抗血管生成疗法，如舒尼替尼（sutent），革新了肾细胞癌(RCC)的治疗。然而，对耐药性如何产生的不确定理解以及缺乏易于驾驭的实验系统阻碍了进展。我们评估了原代RCC培养(来源于肿瘤和肿瘤移植物)在体外向内皮细胞(EC)和成纤维细胞信号的潜力，并在绒毛膜尿囊膜(CAM)试验中刺激体外血管生成。从65例患者中，建立了27个原代培养，包括几例对舒尼替尼耐药的RCC患者。在共培养试验中，RCC细胞支持EC存活，在CAM试验中诱导血管生成。rcc诱导的EC生存率在一半的肿瘤中对舒尼替尼敏感，而在耐药患者的肿瘤中则难以维持。舒尼替尼敏感性与血管内皮生长因子(VEGF)的产生相关。RCC在EC中诱导了旁分泌细胞外信号调节激酶(ERK)的激活，舒尼替尼在敏感肿瘤中抑制了ERK，但在耐药肿瘤中没有。由成纤维细胞中成纤维细胞生长因子受体底物2 (FRS2)的磷酸化决定，RCC广泛诱导低水平成纤维细胞生长因子受体(FGFR)信号通路。VEGF/血小板源性生长因子(PDGF)/FGF受体抑制剂联合抑制EC中ERK的激活，而在部分肿瘤中，成纤维细胞中旁分泌ERK的激活被阻断。我们的数据显示，RCC通过VEGF依赖和独立的途径激活EC，舒尼替尼敏感性与VEGF介导的ERK激活相关，并且联合抑制VEGF/PDGF/FGF受体足以抑制EC中的有丝分裂信号，但在成纤维细胞中没有。

　　在这里，我们评估一个重要的临床问题：针对血管生成的药物的耐药性。采用原代肿瘤培养与靶细胞(EC和成纤维细胞)或CAM检测相结合的方法，我们深入了解了RCC旁分泌信号和潜在的耐药机制。

　　舒尼替尼（sutent）最初被设计用来抑制表达血小板衍生生长因子受体(PDGFRs)和VEGFRs的细胞；然而，关于舒尼替尼在肾癌中抑制的细胞类型的数据仍然存在争议。这种争论是由于缺乏适当的实验系统造成的。理想情况下，舒尼替尼对治疗患者肿瘤活检标本中不同细胞类型的影响将被分析。然而，这是具有挑战性的。为了研究舒尼替尼的作用，我们开发了几种实验系统，包括使用肿瘤细胞条件培养基的体外刺激实验、共培养试验、体外CAM试验和肿瘤移植。我们的数据强烈表明舒尼替尼并不直接作用于肿瘤细胞。即使舒尼替尼浓度高于患者Cmax的10倍，也不会影响RCC肿瘤细胞株的有丝分裂信号或增殖。此外，舒尼替尼给药对小鼠原位移植人RCC的影响的研究表明，在与人暴露浓度匹配的情况下，舒尼替尼不能抑制肿瘤细胞。我们认为，在长时间的治疗过程中，肿瘤细胞中有丝分裂信号的抑制是血管生成减少的间接影响。

　　我们发现，来自患者肿瘤的原代RCC培养物在体外支持EC的存活。在大约50%的肿瘤中，肾细胞癌支持EC存活的能力被舒尼替尼抑制。我们观察到舒尼替尼（sutent）敏感性与EC中ERK抑制之间的相关性。舒尼替尼敏感的肿瘤在舒尼替尼存在下无法维持EC中的ERK磷酸化。相反，舒尼替尼耐药肿瘤在EC中均维持ERK激活，尽管存在舒尼替尼。虽然这样的试验不容易纳入临床实践，但我们的数据表明，在EC与肿瘤样本共培养时，ERK的激活可以作为舒尼替尼敏感性的指标。重要的是，在体外共培养中观察到的舒尼替尼敏感性是通过在体内的独立CAM试验重现的，这突出了它的可靠性。

　　我们还发现VEGF分泌与舒尼替尼（sutent）敏感性之间的关系。关于VEGF在预测肿瘤对舒尼替尼敏感性中的作用，文献中存在争议。患者血浆VEGF水平似乎与舒尼替尼敏感性无关。然而，VEGF在血浆中的水平可能并不意味着VEGF由肿瘤产生，而其他细胞产生VEGF。另一方面，肿瘤中的VEGF mRNA水平可能与舒尼替尼的反应性相关(66)。虽然这种方法侧重于mRNA而不是蛋白质的测量，但我们发现，在我们的试验中，产生最多VEGF的肿瘤对舒尼替尼最敏感。我们的数据表明，肿瘤VEGF水平可以作为舒尼替尼在RCC细胞中敏感性的替代生物标志物。

　　我们发现RCC细胞激活EC和成纤维细胞中的FGFR。FGF2以前被认为是抗vegf治疗耐药性的中介。FGF2出现于表达猴病毒癌蛋白的胰腺β细胞转基因肿瘤模型的耐药性研究中。第二项研究表明FGF2足以克服舒尼替尼对EC的影响。然而，两项研究都没有评估这一途径在肾癌中的作用。我们发现，RCCs表达多种FGFs，并统一激活FGFR(通过使用磷酸化frs2确定)。此外，FGFR活化可能有助于肿瘤亚群EC中ERK的活化。

　　我们的数据表明，rcc可大致分为3个亚型。第一种亚型：舒尼替尼（sutent）敏感的特征是高VEGF生成和VEGF依赖EC的激活。第二种亚型：舒尼替尼耐药和dovitinib敏感的特征是VEGF的产生较低，但fgf的产生较高，导致舒尼替尼耐药/dovitinib敏感的EC和成纤维细胞的激活。第三种亚型：对舒尼替尼和dovitinib都有抗性，产生至少一种能独立于dovitinib激活成纤维细胞(或其他细胞类型)的生长因子。微信扫描下方二维码了解更多：