普纳替尼Ponatinib对人类肿瘤性MC生长和存活的影响

　　Ponatinib是一种新型的有前途的TKI，已开发用于治疗晚期耐药性慢性粒细胞白血病。ponatinib的靶点范围很广，包括KIT和几种致癌下游激酶。在经过大量预处理的费城染色体阳性白血病患者中，发现ponatinib非常有效。在当前的研究中，我们检查了普纳替尼对人类肿瘤性MC生长和存活的影响。我们的数据显示，ponatinib在原发性肿瘤性MC以及HMC-1细胞中发挥主要的生长抑制作用。我们的数据还表明KIT突变体D816V引入了对ponatinib的部分抗性，证实了先前发表的结果。最后，我们的数据显示，ponatinib和midostaurin以及ponatinib和dasatinib在对肿瘤性MC产生生长抑制作用方面相互协同。　　

　　各种不同的研究表明，低浓度(nM)的ponatinib可抑制慢性粒细胞白血病患者白血病细胞的增殖。在我们的实验中，我们能够证明普纳替尼抑制源自晚期SM的肿瘤性MC的增殖，包括HMC-1细胞。然而，与缺乏KITD816V的HMC-1.1细胞相比，抑制表现出KITD816V的HMC-1.2细胞的增殖需要高100倍的普纳替尼浓度。这一观察结果证实了之前的一项研究并表明D816V突变体引入了对ponatinib的相对抗性。然而，与其他TKI（例如伊马替尼或尼罗替尼）不同，使用具有药理学意义的浓度的ponatinib仍可证明对表达KITD816V的原发性肿瘤性MC的完全生长抑制。这最好通过普纳替尼对其他关键信号分子（包括Lyn和STAT5）的额外影响来解释，这些分子已知在这些细胞以及HMC-1.1和HMC-1.2细胞中以活化形式表达。　　

　　在下一步中，我们探索了Ponatinib诱导HMC-1细胞生长抑制的机制。生长抑制伴随着细胞周期停滞和细胞凋亡的诱导，如通过光学显微镜、流式细胞术、TUNEL测定和caspase-3裂解分析所评估的。这些数据表明，普纳替尼通过多种机制对肿瘤性MC产生生长抑制作用，这表明这些细胞中有广泛的相关（和响应）靶点。　　

　　我们最近描述了晚期SM中的肿瘤性MC表达几种KIT依赖性和独立的下游信号分子，包括活化（磷酸化）Lyn、Btk和STAT5。在当前的研究中，发现ponatinib在合理（和可比较）的药物浓度（nM范围）下抑制两个HMC-1亚克隆中的p-Lyn和p-STAT5。一个令人惊讶的结果是ponatinib未能阻断p-Btk，一种已被证明有助于肿瘤性MC存活的激酶。这一观察结果促使我们在肿瘤性MC中测试针对Btk的siRNA和ponatinib之间的组合。由于已描述达沙替尼与Btk结合并阻断肿瘤细胞中的Btk活性，我们还研究了普纳替尼和达沙替尼联合用药的效果。事实上，我们发现这两种药物联合使用时，会对肿瘤性MC产生协同生长抑制作用。总而言之，我们的数据表明Btk是介导ponatinib和dasatinib之间协同作用的相关靶标，而ponatinib和midostaurin之间的协同作用可能最好用其他不同识别的靶标来解释，例如被ponatinib阻断但不被midostaurin阻断的Lyn。　　

　　在过去几年中，许多不同的KIT靶向药物，包括达沙替尼和Midostaurin，已在临床试验中进行了测试，目的是阻止侵袭性SM和MCL患者的恶性MC生长。关于Btk，达沙替尼特别令人感兴趣。事实上，已经描述了达沙替尼阻断肿瘤性MC中的Lyn和Btk活性。然而，由于其半衰期短和副作用，达沙替尼预计不会对晚期SM患者产生重大的持续临床影响。事实上，达沙替尼的第一次临床研究相当令人失望。最近有人描述Midostaurin可以抑制侵袭性SM和MCL患者的肿瘤细胞生长，目前正在进行的临床试验的数据非常令人鼓舞。然而，不幸的是，这种药物的作用往往是短暂的，而且经常会复发。因此，米司他林作为单一药物治疗晚期SM可能不是很有用。　　

　　对midostaurin的相对抗性可能是由于额外的（KIT独立的）致癌分子和通路在肿瘤性MC中被激活并有助于肿瘤性MC的存活。这些途径不受midostaurin的抑制，因此可能会导致疾病进展，尽管进行了治疗。因此，midostaurin和其他药物（如普纳替尼）的组合可能是优化这些患者治疗的有趣方法。　　

　　出于多种原因，Ponatinib可能是Midostaurin的合适组合伙伴。首先，两种药物的靶谱不同。事实上，我们能够证明当作为药物组合应用时，即使在次优浓度下，midostaurin和ponatinib也能阻断HMC-1细胞中的许多抗凋亡激酶，包括p-KIT、p-Lyn和p-STAT5。此外，根据KIT突变的存在和类型，ponatinib抑制KIT磷酸化，从而可能有助于抑制异常细胞存活。因此，我们研究了“midostaurin+ponatinib”组合是否会协同甚至协同作用诱导肿瘤性MC的生长抑制和细胞死亡。我们能够证明midostaurin和ponatinib在诱导HMC-1细胞生长抑制和凋亡方面相互协同。我们还能够证明应用的两种药物，ponatinib和Midostaurin，对KIT或STAT5等常见靶点的磷酸化产生很强的协同作用。因此，我们假设对细胞增殖和活力的协同药物相互作用是由对共同靶点的协同作用和对米妥林或普纳替尼不同识别激酶的抑制作用造成的。　　

　　然后我们研究了普纳替尼是否也对原发性肿瘤性MC产生生长抑制作用。至于HMC-1.2细胞，在所有检查的样品中都观察到原发性肿瘤性MC的生长抑制，在KITD816V+患者中IC50值<0.5μM。值得注意的是，在分析的一半患者中（10人中有5人），包括两名患有侵袭性SM的患者，即使是100nM的ponatinib也会导致显着的生长停滞。这是特别令人感兴趣的，因为在剂量递增研究中，每天45mg（对应于145nM的平均峰值血浆浓度）是进一步临床试验的推荐剂量。我们还检查了ponatinib和midostaurin在原代患者来源细胞上的组合。再次，我们能够证明这两种药物在阻断原发性肿瘤性MC的增殖方面相互合作。由于这两种药物，ponatinib和midostaurin，在结构、靶点谱和已知（报告）的副作用方面不同，联合用药可能是侵袭性SM或MCL患者的有效且耐受性更好的治疗选择。这些发现很有希望，因为侵袭性SM或MCL患者对化疗和靶向药物的反应通常很差，这表明需要开发新的抗肿瘤药物和治疗概念。问题是如何在晚期SM患者中应用普纳替尼。亚克隆对ponatinib的反应比对midostaurin的反应更好。另一种可能性是直接在晚期SM患者中联合使用ponatinib和Midostaurin。我们的数据将支持这种方法。然而，就目前而言，这种可能性仍然是假设性的。事实上，在计划联合试验之前，现在有必要在晚期SM中使用ponatinib作为单一药物进行临床试验，以记录这些患者的临床活动。　　

　　我们的研究表明，多激酶抑制剂普纳替尼对源自晚期SM患者的HMC-1细胞和原发性肿瘤性MC发挥抗肿瘤作用。此外，发现ponatinib可增强Midostaurin的作用，这是一种目前非常成功地用于治疗侵袭性SM或MCL患者的药物。普纳替尼与米多林或普纳替尼Ponatinib与达沙替尼联用是否可用于侵袭性SM和MCL患者体内并产生协同作用，目前尚不清楚。详情请扫码咨询：