多吉美/索拉非尼的活性在很大程度上依赖于T细胞

　　肿瘤微环境 (TME) 是通过肿瘤细胞和宿主基质元素之间复杂的相互作用建立和维持的。因此，针对肿瘤多种细胞成分的疗法可能是最有效的。多吉美/索拉非尼是一种多激酶抑制剂，可改变肿瘤细胞和宿主基质细胞的信号通路。因此，我们探索了索拉非尼在小鼠 HER-2-(neu) 过表达乳腺肿瘤模型中的潜在免疫调节作用，以及与 HER-2 靶向粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子 (GM-CSF)-分泌疫苗（3T3neuGM）。体外，索拉非尼抑制 HER-2 过表达 NT2.5 肿瘤细胞的生长，诱导细胞凋亡。索拉非尼还干扰 ERK MAPK、p38 MAPK 和 STAT3 信号传导以及细胞周期蛋白 D 表达，但不影响 HER-2 或 AKT 信号传导。在体内，单药索拉非尼破坏了肿瘤相关的脉管系统并诱导了肿瘤细胞凋亡，有效地诱导了具有免疫能力的 FVB/N 小鼠中已建立的 NT2.5 肿瘤的消退。免疫耗竭研究表明，肿瘤消退需要CD4+和 CD8+T 细胞。与索拉非尼治疗或单独接种疫苗相比，索拉非尼治疗不会影响荷瘤 FVB/N 小鼠接种 3T3neuGM 诱导的肿瘤清除率。体内研究进一步表明，索拉非尼增强了 CD4+和 CD8+T 细胞在接种疫苗小鼠的 TME 中的积累。总之，这些发现表明分泌 GM-CSF 的细胞免疫疗法可以与索拉非尼结合，而不会损害基于疫苗的免疫反应。

　　此处提供的数据支持多项新发现。首先，酪氨酸激酶抑制剂多吉美/索拉非尼在体外和体内抑制 NT2.5 乳腺癌细胞的生长。体外研究表明，细胞生长抑制通过 MAPK 依赖性和独立机制发生。其次，索拉非尼治疗的 NT2.5体内肿瘤的消退是 T 细胞依赖性的，需要 CD4+和 CD8+T 细胞。第三，索拉非尼治疗与疫苗接种相结合，增加了 TME中内源性 CD8+T 细胞的数量。最后，索拉非尼作为单一药物或与 3T3neuGM 联合使用可增加分泌 IFNγ 的 CD4+TME 中的 T 细胞。总的来说，这项研究有效地证明了同时治疗索拉非尼和肿瘤抗原特异性、基于 DC 的疫苗策略的潜力，以诱导有效的肿瘤免疫。

　　成功靶向 TME 中多个通路的癌症疗法理论上将带来更大的临床益处，部分原因在于它们能够靶向对疾病进展至关重要的多个致癌通路。在这里，我们表明单药多吉美/索拉非尼通过多种机制抑制HER2+乳腺肿瘤的生长，包括抑制细胞生长、诱导细胞死亡和抑制血管生成。在体内，每天服用 30 mg/kg 索拉非尼的小鼠完全清除了大多数经治疗的荷瘤 FVB/N 小鼠的 NT2.5 肿瘤，并表现出增加的肿瘤细胞死亡，这反映在活化的半胱天冬酶 3 表达增加。这些数据与索拉非尼在其他癌症模型中对 Ras/MEK/ERK 通路的影响一致。我们扩展了这些发现以表明与使用 p38 MAPK 或 ERK MAPK 特异性抑制剂治疗相比，索拉非尼治疗后 MAPK 下游靶标细胞周期蛋白 D1 的表达降低最大。与单独的 p38 MAPK 或 ERK MAPK 抑制剂不同，索拉非尼治疗也降低了细胞周期蛋白 D3 的表达。这些发现表明，索拉非尼靶向对细胞周期进程和增殖至关重要的 MAPK 独立途径，并且与先前发表的报告一致，表明细胞周期蛋白 D1 和细胞周期蛋白 D3 受到不同调节。针对这两种细胞周期蛋白的疗法在抑制细胞生长和成功诱导肿瘤消退方面可能最有效。我们还表明，索拉非尼显着减少了 TME 内 CD31/PECAM 阳性微血管的数量，这与所报道的药物抗血管生成作用一致。

　　重要的是，我们证明了多吉美/索拉非尼介导的体内肿瘤消退严重依赖于T 细胞。CD4+和 CD8+T 细胞的同时消耗完全取消了单药索拉非尼的功效。此外，索拉非尼治疗可保护小鼠在再次攻击后免于肿瘤生长，这表明索拉非尼单药治疗可导致某些小鼠产生免疫记忆。进一步的研究表明，索拉非尼增加了肿瘤浸润性 IFNγ 分泌 CD4+T 细胞的数量，并在较小程度上增加了肿瘤内 CD8+T 细胞的积累。重要的是，虽然有几项研究报告了索拉非尼对免疫系统的不同抑制和刺激作用。这是第一项显示索拉非尼介导的肿瘤清除的 T 细胞依赖性作用机制的研究。多项体外研究表明，根据所使用的索拉非尼浓度，索拉非尼可以抑制或增强 T 细胞活化、增殖和效应子功能，亚药理学剂量（低于 1 μM）激活 T 细胞，药理学剂量（5-10 μM）抑制 T 细胞扩散。我们在体外观察到索拉非尼对初始 CD4+和 CD8+T 细胞启动和增殖的类似作用，其中超过 1 μM 的剂量往往会抑制体外T 细胞增殖。相比之下，我们发现索拉非尼对每天服用 30 mg/kg 的小鼠的CD4+或 CD8+T 细胞增殖没有可检测的影响。此外，药理学剂量的索拉非尼 (5–10 μM)在体外抑制 DC 激活、增殖、迁移和细胞因子分泌，并增强 IL-12 分泌，同时降低用 LPS 和 LPS 预处理的骨髓源性巨噬细胞中的 IL-10 分泌。这些发现表明，多吉美/索拉非尼的药理学剂量对各种骨髓细胞有不同的影响，证实了索拉非尼调节骨髓和淋巴激活以改变体外T 细胞活性。

　　总的来说，这些发现表明多吉美/索拉非尼调节内源性 CD4+和 CD8+T 细胞反应。相比之下，索拉非尼不影响荷瘤 FVB/N 小鼠的 Treg 或 MDSC 稳态或功能。此外，索拉非尼不调节 CD4+或 CD8+T 细胞上抑制性受体 PD-1 或 TIM-3 的表达。我们的数据不同于之前的研究结果，即索拉非尼降低 Treg 数量和功能。我们表明，单独使用 3T3neuGM 会降低 PD-1 并增加 TIM-3 表达，但是索拉非尼与 3T3neuGM 联合使用会增加 CD8+上的 41BB 受体表达TME 中的 T 细胞。索拉非尼联合疫苗接种不影响CD4+T细胞亚群上免疫检查点受体的表达。总的来说，我们的数据表明，增强的 CD4+和 CD8+T 细胞反应不是由于抑制性细胞群或抑制性检查点受体（如 PD-1）的活性降低，而是由于促进了功能性记忆 T 细胞的进化。

　　总之，我们首次表明多吉美/索拉非尼的活性在很大程度上依赖于 T 细胞，并且它可以与基于 DC 的、靶向 HER-2 的肿瘤细胞疫苗有效结合，以增强乳腺肿瘤清除率和延长小鼠的无瘤生存期。由于其能够靶向 TME 的多个方面，包括宿主肿瘤细胞、内皮细胞和免疫细胞，因此需要进一步研究将多吉美/索拉非尼与癌症的免疫治疗方式相结合。微信扫描下方二维码了解更多：