达拉非尼(dabrafenib)的人孕烷X受体活性

　　人孕烷 X 受体 (hPXR) 被大量内源性和外源性化合物激活，在调节肝脏和胃肠道药物代谢和清除的解毒酶和转运蛋白的控制中起关键作用。hPXR 还参与多药耐药性的发展和增强的癌细胞侵袭性。此外，它被药物无意激活会介导药物之间的相互作用并导致严重的不良事件。在这种情况下，尚未彻底研究被怀疑激活 hPXR 和人类组成型雄甾烷受体 (hCAR) 的抗癌 BRAF 抑制剂达拉非尼（dabrafenib）的潜力。使用不同的报告细胞分析，我们证明达拉非尼可以与其参考激动剂 SR12813 一样有效地激活 hPXR，而它不会激活小鼠或斑马鱼 PXR 或 hCAR。我们还表明达拉非尼与重组 hPXR 结合，诱导结肠 LS174T-hPXR 癌细胞和人肝细胞中 hPXR 响应基因的表达，并最终增加 LS174T-hPXR 细胞的增殖。我们的研究表明，通过使用一组不同的细胞技术，可以改进对新开发药物的 hPXR 激动剂活性的评估。

　　达拉非尼（dabrafenib）的推荐剂量为 150 mg，每日两次，口服给药，血浆浓度为 2160 ng/mL。给药后，达拉非尼（dabrafenib）主要通过氧化代谢，生成羟基-dabrafenib，随后生成羧基-dabrafenib，后者经过脱羧生成去甲基-dabrafenib，这是一种活性衍生物，可进一步转化为次要的氧化产物。已知 CYP3A4 和 CYP2C8 在这些代谢步骤中起主要作用，并且在体外和体内显示达拉非尼可诱导 CYP3A4 和 CYP2D6 表达。这些研究表明，参与药物代谢的基因的主要调节因子，如核受体 hPXR 或 hCAR，可以介导细胞对达拉非尼的反应并影响其他相关药物的作用。然而，没有研究表征达拉非尼的 hPXR 激动剂活性。我们的研究结果首次证明，与参考 hPXR 激动剂 SR12813 相似，达拉非尼是过表达这种核受体的各种细胞系中 hPXR 的选择性激活剂。对于 dabrafenib 和 SR12813，可以注意到 hPXR 反式激活在细胞类型方面的差异。这可能归因于 HepG2、LS174T、22RV-1 和 HeLa 细胞代谢能力的差异。总之，这些结果证实了达拉非尼（dabrafenib）可以调节参与异生物质代谢的关键酶的表达，并证明这种作用与 dabrafenib 的 hPXR 激动剂特性有关。这些结果具有临床重要性，因为 dabrafenib 可以直接影响其自身的代谢或其他药物或药物的代谢，特别是 MEK 抑制剂，例如与达拉非尼（dabrafenib）联合批准用于治疗转移性黑色素瘤的曲美替尼。在这方面，我们目前正在研究 dabrafenib 是否可以增加过度表达 hPXR 的黑色素瘤细胞中代谢酶的活性，以及这是否会影响与曲美替尼联合治疗的疗效。

　　虽然达拉非尼（dabrafenib）通常通过靶向 BRAFV600E来抑制癌细胞的增殖，但它也被证明可以诱导表达野生型 BRAF 和突变 RAS 的肿瘤细胞系的增殖。体外研究报告了 BRAFV600E 的半抑制浓度 (IC50) 值为 0.65 nM。在这里，我们表明达拉非尼可以刺激 LS174T-hPXR 细胞的生长，EC5028 纳米。这种效应仅在 hPXR 稳定过表达时观察到，强烈表明这种效应至少部分是由 hPXR 介导的，也可能归因于 FGF19 表达的增加，FGF19 是一种已知参与细胞增殖的 hPXR 靶基因。并且在用达拉非尼处理的 LS174T-hPXR 细胞中显着增加。有趣的是，PXR 配体利福平也显示出诱导 FGF19 介导的 PXR 转染的 LS174T 细胞增殖。达拉非尼的血浆浓度（2160 ng/mL 或 4.15 μM）预计对 BRAFV600E 和和 hPXR，表明使用较低浓度的达拉非尼可以提高其选择性，同时保持其疗效。另一种选择是设计对 BRAF 具有相同亲和力但不会激活 hPXR 的达拉非尼类似物。我们进行了此类工作，并且能够合成缺乏 PXR 活性的达拉非尼类似物（Schneider 等人，准备中）。

　　由于抗雄激素、抗雌激素、抗癫痫或抗病毒药物等众多药物都是 hPXR 的配体，我们的结果进一步强调需要评估以更彻底的方式开发的药物的潜在激动剂活性。事实上，之前评估这种活性的临床前研究通常是在小鼠或大鼠模型中进行的，但我们的结果清楚地表明，达拉非尼（dabrafenib）对 PXR 的小鼠直系同源物没有表现出任何显着的活性。为了改进对 PXR 激动剂活性的评估，我们因此建议使用适应的细胞模型来筛选 hPXR 激动剂活性，并且我们提出了一组体外技术，能够对新开发的药物进行此类评估。这些原始模型还可以用于设计目前使用的药物的新类似物，没有 hPXR 结合和激活。微信扫描下方二维码了解更多：