奥希替尼(AZD9291)降低 PD-L1mRNA表达并诱导其蛋白质降解

　　奥希替尼 (AZD9291) 是第三代表皮生长因子受体 (EGFR) 酪氨酸激酶抑制剂 (TKI)，已被批准用于治疗 EGFR 突变的非小细胞肺癌 (NSCLC)。在 NSCLC 患者中，EGFR 突变可能与程序性死亡配体-1 (PD-L1) 的高水平表达相关。在这里，我们发现奥希替尼在体外降低了人 EGFR 突变 NSCLC 细胞中的PD-L1 表达.Osimertinib (125 nmol/L) 显着抑制 NCI-H1975 和 HCC827 细胞中的 PD-L1 mRNA 表达。用 N-连接糖基化抑制剂衣霉素预处理，奥希替尼明显减少了新 PD-L1 蛋白的产生，这可能是由于 mRNA 的减少。在分别用放线菌素 D 和放线菌酮阻断转录和翻译过程后，奥希替尼继续降低 PD-L1 的表达，表明奥希替尼可能会在翻译后水平降解 PD-L1，这一点通过放线菌酮追踪试验得到证实，揭示在 NCI-H1975 和 HCC827 细胞中，奥希替尼 (125 nmol/L) 将 PD-L1 的半衰期分别从大约 17.8 小时和 13.8 小时降低到 8.6 小时和 4.6 小时。用蛋白酶体抑制剂（MG-132 或硼替佐米）预处理可阻止奥希替尼诱导的 PD-L1 降解，但自噬抑制剂（氯喹）没有。此外，LiCl 对 GSK3β 的抑制阻止了奥希替尼诱导的 PD-L1 降解。结果表明，奥希替尼降低 PD-L1 mRNA 表达并诱导其蛋白质降解，表明奥希替尼可能重新激活 EGFR 突变的 NSCLC 患者肿瘤微环境中 T 细胞的免疫活性。

　　在目前的研究中，我们首次证明奥希替尼抑制 EGFR 磷酸化不仅降低了 PD-L1 mRNA 的表达，还诱导了 PD-L1 的蛋白酶体降解，从而为 PD-L1 的分子机制提供了新的思路EGFR-TKIs 的调节。

　　奥希替尼 (AZD9291) 是第三代 EGFR-TKI，已被批准用于治疗 EGFR T790M 突变的 NSCLC 患者。与二线标准化疗相比，奥希替尼在一线 EGFR TKI 治疗后疾病进展的 EGFR T790M 阳性 NSCLC 患者中表现出优异的无进展生存期和安全性。此外，与化疗相比，缓解持续时间、客观缓解率和疾病控制率也取得了显着改善。此外，还有一项正在进行的 III 期研究，与吉非替尼和厄洛替尼相比，奥希替尼作为 EGFR 突变 NSCLC 患者的一线治疗的安全性和有效性 (NCT02296125）。临床研究表明，高水平的PD-L1的表达在EGFR突变的NSCLC患者中有可能。PD-L1 可以位于免疫细胞和肿瘤细胞的表面，并与 T 细胞受体 PD-1 相互作用以帮助肿瘤逃避免疫破坏。在这里，我们首次证明奥希替尼对 EGFR 活性的抑制不仅降低了 PD-L1 mRNA 表达，而且还通过 EGFR 驱动的 NSCLC 细胞中的蛋白酶体途径导致 PD-L1 降解。

　　先前的研究表明，几种转录因子可以调节 PD-L1 的表达。Casey等人报道 MYC 直接调节人肿瘤和小鼠肿瘤细胞中的PD-L1 mRNA 表达。虽然奥希替尼显着降低 MYC 表达，但 MYC 的敲低不能降低 NCI-H1975 和 HCC827 细胞中 PD-L1 mRNA 和蛋白质的表达（数据未显示），这与另一项研究一致。此外，p65 参与吉非替尼诱导的 EGFR 驱动的 NSCLC 细胞中 PD-L1 mRNA 表达的降低，这与 p65 信号传导抑制剂支持的奥希替尼的作用不一致（数据未显示）。此外，据报道，信号转导和转录激活因子 3 (STAT3) 信号通路可以调节 EGFR 突变和 ALK 阳性 NSCLC 中的PD-L1 表达。然而，我们证明奥希替尼可以抑制 HCC827 细胞中的 STAT3 信号传导，但在 NCI-H1975 细胞中却没有显着的抑制（数据未显示），这表明 STAT3 不是奥希替尼触发的 PD-L1 下调的关键转录因子mRNA 表达。尽管我们指出奥希替尼确实降低了 PD-L1 的 mRNA 水平，但需要进一步研究参与该过程的转录因子。

　　随着转录或翻译过程的抑制，奥希替尼 (AZD9291) 仍能降低 PD-L1 的表达，表明奥希替尼可能会诱导 PD-L1 蛋白降解。在肿瘤微环境中，肿瘤坏死因子 α 通过 p65 对 COP9 信号小体亚基 5 (CSN5) 的反式激活诱导 PD-L1 稳定，而姜黄素对 CSN5 的抑制导致 PD-L1 泛素化和降解。Lastwika等人表明，抑制 AKT-mTOR 信号会增加 PD-L1 的溶酶体降解。然而，我们发现溶酶体抑制剂氯喹不能逆转 PD-L1 降解，尽管高浓度奥希替尼治疗诱导 EGFR 驱动的 NSCLC 细胞发生自噬。不一致的是，据报道 GSK3β 介导的 PD-L1 通过泛素-蛋白酶体系统降解并且 GSK3β 失活是 PARP 抑制剂诱导的 PD-L1 上调所必需的。同样，我们的实验表明，奥希替尼诱导的 PD-L1 降解可以被蛋白酶体抑制剂逆转。此外，氯化锂对 GSK3β 的灭活减弱了奥希替尼诱导的 PD-L1 下调。总的来说，奥希替尼通过蛋白酶体激活 GSK3β 并诱导 PD-L1 降解。

　　总之，我们证明了奥希替尼 (AZD9291) 对 EGFR 的灭活通过两种机制在 EGFR 突变的 NSCLC 细胞中降低了 PD-L1。具体而言，奥希替尼引起 PD-L1 mRNA 表达的显着下调并诱导 PD-L1 的蛋白酶体降解。然而，奥希替尼调节的 PD-L1 在肿瘤微环境中的功能需要进一步研究。微信扫描下方二维码了解更多：