INC280卡马替尼诱导c-MET扩增阳性弥漫性胃癌细胞凋亡

　　Wnt/β-catenin 信号通路和 EMT 与广泛的 GC 进展事件相关。在没有过度增殖和 β-连环蛋白激活的情况下，在启动弥漫性 GC 的癌症侵袭性进展中观察到 EMT。SNAIL 是 E-钙粘蛋白表达的关键转录抑制因子，是众所周知的 EMT 触发因素，可导致小鼠不可逆的肿瘤发生。最近的研究表明，原癌基因 MET 的下调会抑制前列腺癌中的 EMT。此外，MET 扩增是 GC 中常见的分子异常。

　　在本研究中，我们应用 RNA-seq 方法来鉴定 34 名患者的 GC 和邻近正常组织中差异表达的 MET 和 RUNX3 基因。我们根据 Lauren 的分类评估了 INC280 对 GC 增殖、迁移和细胞凋亡的抑制作用。为了研究卡马替尼（INC280）对有或没有 RUNX3 的 c-MET 扩增细胞的影响，在 GC 细胞中评估了 c-MET 和 RUNX3 蛋白表达。c-MET 和 RUNX3 蛋白在 SNU5 和 MKN45 细胞中表达。有趣的是，p-MET 扩增的胃癌细胞系属于弥漫型。我们测试了 INC280 在 MKN28（肠型）、SNU620（RUNX3 阴性弥漫型）和 MKN45（RUNX3 阳性弥漫型）细胞中的剂量依赖性抑制作用。用不同浓度的 INC280 处理细胞 48 小时，通过使用 MTS 测定评估细胞活力来确定最佳剂量。在 c-MET 扩增的 SNU620 和 MKN45 细胞中，用 INC280 处理以剂量依赖性方式降低细胞活力，但在 c-MET 减少的 MKN28 细胞（n = 3）中不降低。INC280的 IC50值使用非线性回归分析 [IC50 = 1.7 nM (MKN45) 或 2.4 nM (SNU620)] 确定。

　　癌症是一种由基因改变引起的疾病。因此，我们在 GC 样本及其匹配的相邻正常组织中进行了 RNA-seq，以识别遗传改变。RNA-seq 研究表明 RUNX3 水平降低与 c-MET 显着相关，但细胞系在 RUNX3 和 c-MET 之间没有相关性。RUNX3损失是在GC进展的早期事件由于异常的Wnt /β-catenin信号，其介导EMT在GC，一种方法，其中上皮细胞被转化成迁移和侵袭的细胞。

　　c-Met的扩增存在于GC的2-20％，并且与不良预后相关。已知 c-MET 可激活癌细胞增殖、迁移和肿瘤侵袭。最近的临床前研究表明，c-MET 抑制剂，包括 onartuzumab、foretinib、克唑替尼和 PHA-665752，在 GC 患者的临床试验中失败。因此，确定一个对 c-MET 抑制敏感的合适的 c-MET 阳性 GC 组是一个紧迫的问题。因此，在本研究中，通过对 MKN45 细胞的生长抑制测定，筛选了 c-MET 抑制剂药物，以确定它们是否可以用作治疗 GC 的治疗剂。在测试的六种c-MET抑制剂药物中，INC280表现出较高的抑制活性；因此，选择这种药物进行进一步研究。INC280 可对抗推定的 c-MET 依赖性肿瘤类型。在本研究中，INC280 显示出增加的抑制和凋亡率，表明在 MKN45 细胞中具有治疗效用。当用卡马替尼（INC280）处理 MKN45 细胞时，总 c-MET、磷酸化 c-MET、总 β-连环蛋白、CCND1、c-MYC、CD31 和 SNAIL 蛋白或基因的水平降低。相比之下，磷酸化 β-catenin、RUNX3、E-cadherin 和 GSK-3β 的水平增加。我们的结果还表明 INC280 可能通过降低 SNAIL 表达来抑制 EMT。事实上，我们的结果表明 INC280 以及 GSK3β 介导的信号传导通过抑制弥漫性 GC 中的 c-MET 磷酸化来抑制 Wnt/β-catenin 信号传导。

　　这项研究的结果表明，与正常相邻胃粘膜相比，c-MET 和 RUNX3 在 GC 中的表达存在差异，并发现低 RUNX3 水平与 c-MET 过表达和肿瘤复发之间存在相关性。卡马替尼（INC280）在 c-MET 表达的弥漫性 GC 中显示出显着的抑制活性。我们的体外研究强烈支持 INC280 的临床评估，它可以防止 c-MET 相关的 GC。微信扫描下方二维码了解更多：