曲美替尼Trametinib治疗是否调节了TNFα反应

　　我们之前已经证明巨噬细胞和小胶质细胞(这里统称为效应细胞)会分泌TNFα应答受感染的胶质瘤细胞。为了评估在oHSV治疗的背景下，曲美替尼（Trametinib）治疗是否调节了TNFα反应，用二甲亚砜(DMSO)或曲美替尼（Trametinib）预处理1小时的巨噬细胞或小胶质细胞覆盖感染或不感染oHSV的患者来源的原代GBM细胞和胶质瘤细胞系。　　

　　24h后，用ELISA法检测小鼠原代BMDMs、Raw264.7巨噬细胞和BV2小胶质细胞TNFα的分泌。对共培养中TNFα分泌的测量显示，效应细胞经曲美替尼（Trametinib）预处理后显著减少，没有任何证据表明对处理过的效应细胞有毒性。　　

　　在肿瘤微环境中存在的TNFα曾被认为是溶瘤病毒复制和治疗效果的主要障碍。因此，我们接下来在体外评估曲美替尼（Trametinib）对与巨噬细胞共培养的胶质瘤细胞中oHSV感染的影响。在本研究中，我们使用HSV-1衍生的oHSV,rHSVQ。9个感染oHSV的人胶质瘤细胞(感染的多样性[MOI]=0.01)与对照组或曲美替尼（Trametinib）处理的小鼠Raw264.7巨噬细胞重叠并培养48小时。　　

　　利用荧光显微镜根据GFP的表达对感染ohv的细胞进行成像。与以前的报道一致，感染的胶质瘤细胞中加入巨噬细胞明显减少了GFP+细胞。然而，当巨噬细胞经曲美替尼（Trametinib）预处理后，这一效应得到了显著恢复。　　

　　同样，oHSV感染的胶质瘤细胞与经或不经曲美替尼（Trametinib）处理的BMDMs共培养的量化结果显示，曲美替尼（Trametinib）治疗后oHSV复制显著增加(P<0.001)。　　

　　由巨噬细胞或小胶质细胞分泌的TNFα引起的感染细胞凋亡是人类细胞限制HSV-1扩散的主要途径之一。因此，我们研究了曲美替尼（Trametinib）和oHSV治疗对胶质瘤细胞凋亡的影响。与TNFα分泌增加一致的是，当感染的胶质瘤细胞与巨噬细胞共培养时，剪切的PARP和剪切的caspase-8出现了增加。然而，当巨噬细胞被曲美替尼（Trametinib）治疗时，受感染的胶质瘤细胞的凋亡反应减弱。　　

　　综上所述，这些结果表明曲美替尼（Trametinib）处理的巨噬细胞TNFα的表达和分泌减少导致了巨噬细胞介导的ohsv感染的胶质瘤细胞凋亡死亡，从而增加了病毒的体外复制。详情请扫码咨询：