吉非替尼(Gefitinib)和多西他赛组合对肺癌的作用

　　最近的临床试验表明，表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂（EGFR-TKIs）和化疗的序贯联合可延长EGFR突变晚期非小细胞肺癌（NSCLC）患者的PFS和OS。本研究的目的是评估最佳组合序列并探索其可能的机制。

　　方法

　　PC-9 细胞和 A549 细胞，分别具有突变型和宽型 EGFR 的肺腺癌细胞，分别用多西他赛/吉非替尼（Gefitinib）单独或以不同的组合方案处理。EGFR 和 K-ras 基因状态通过 qPCR-HRM 技术确定。MTT法检测细胞增殖。Western blot检测EGFR、ERK、Akt和IGF-1R的表达和磷酸化。通过流式细胞术观察细胞周期分布。

　　结果

　　仅依次施用多西紫杉醇和吉非替尼 (D→G) 才能在两种细胞系中产生显着的协同效应（组合指数 <0.9）。反向序列 (G→D) 导致两种细胞系中的拮抗相互作用 (CI>1.1)，而同时给药 (D+G) 在 PC-9 细胞和A549 细胞中的拮抗加成效应。机制研究表明，多西紫杉醇诱导的 EGFR 和 ERK 磷酸化被随后使用的吉非替尼抑制，但不会被同时使用吉非替尼抑制。吉非替尼抑制的 EGFR 和 ERK 磷酸化不会被同时或随后的多西紫杉醇给药逆转。D+G 增强了它们对 PC-9 细胞中 IGF-1R 磷酸化的抑制作用。

　　结论

　　EGFR-TKIs 之后的细胞毒性药物可能是 EGFR 突变 NSCLC 细胞抗增殖作用的最佳组合，EGFR 和 ERK 的磷酸化可能有助于这种作用。

　　本研究在 PC-9 细胞（EGFR 突变体，K-ras WT）和 A549 细胞（EGFR WT，K-ras 突变体）中研究了吉非替尼（Gefitinib）和多西他赛在三种不同组合方案中的序列依赖性抗增殖作用。当吉非替尼（Gefitinib）和多西他赛在两种细胞系中单独使用时，吉非替尼对PC-9细胞的抑制作用明显强于对A549细胞的抑制作用，这与之前的报道一致。然而，吉非替尼（Gefitinib）的IC50在PC-9中仅为A549的一半；而在临床工作中，吉非替尼对EGFR突变患者的疗效远优于多西他赛。我们认为这可能是因为在体外研究中，测试剂直接对靶细胞的应用，但在体内研究药物通常通过循环系统给药，这会影响不同药物的分布和浓度。

　　我们的结果还表明，多西紫杉醇继以吉非替尼 (D→G) 不仅在 EGFR 突变体和 K-ras WT PC-9 细胞中的抗肿瘤作用显着优于其他模式，而且在 EGFR WT 和 K -ras 突变 A549 细胞。这与几项临床前研究一致，该研究招募了一组接受化疗/EGFR-TKI 治疗的不同肺癌细胞系，并报告化疗→EGFR-TKI 的顺序优于其他方式。包括 WJTOG0203、INFORM 和 FASTACT-2 在内的一些 III 期临床试验也证实，化疗后序贯 EGFR-TKI 显着改善了结果。因此，我们的研究结果为克服 EGFR-TKI 和化疗的治疗平台提供了强有力的临床前支持，并且可能对对抗难治性 NSCLC 尤其重要。需要注意的是，在本研究中，在 EGFR 野生型细胞系中也观察到了 D→G 协同作用。尽管一些临床前和临床试验也报告了类似的结果，但更多的数据表明野生型 EGFR 患者无法从 EGFR-TKI 治疗中受益。我们推测这是因为在我们的研究中对每个细胞系应用了 IC50 剂量的吉非替尼（Gefitinib），这意味着与 PC-9 细胞相比，A549 细胞使用了 1000 倍的吉非替尼。临床工作中显然无法直接复制这种极高剂量的EGFR-TKI，但相对高剂量的EGFR-TKI已经在脑转移的NSCLC患者中进行了尝试并取得了阳性结果。如果在此类亚组中尝试并成功采用类似模式，对野生型 EGFR 患者尤其有益。

　　总的来说，我们的数据表明，在临床工作中可用的组合方式中，最有效的方法是先使用细胞毒药物，然后使用 EGFR-TKI。EGFR 和 ERK 的磷酸化可能促成了这种协同作用。然而，由于只有两个细胞系在该研究中登记的，扩张的NSCLC细胞系具有不同EGFR状态以及所述面板在体内动物模型研究来进一步评估依赖日程效果。还值得在临床试验中比较三种联合方案，以确定晚期 NSCLC 患者可能的“最佳”治疗方式。

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