克唑替尼/赛可瑞诱导的非小细胞肺癌免疫原性细胞死亡

　　免疫原性细胞死亡 (ICD) 将垂死的癌细胞转化为治疗性疫苗并刺激抗肿瘤免疫反应。在这里，我们揭示了一项公正筛选的结果，将高剂量 (10 μM) 克唑替尼（赛可瑞）鉴定为一种 ICD 诱导酪氨酸激酶抑制剂，当与非 ICD 诱导化疗剂（如顺铂）联合使用时，该抑制剂具有出色的抗肿瘤活性。顺铂和高剂量克唑替尼的组合在非小细胞肺癌 (NSCLC) 细胞中诱导 ICD，并有效控制不同（可移植、致癌或致癌基因诱导）原位 NSCLC 模型的生长。这些抗癌作用与 T 淋巴细胞浸润增加有关，并可通过 T 细胞耗竭或干扰素-γ 中和作用消除。克唑替尼加顺铂导致肿瘤中PD-1和PD-L1表达增加，与 NSCLC 对 PD-1 抗体免疫疗法的强烈敏感性相结合。因此，由常规化疗和克唑替尼组成的序贯联合治疗可能对非小细胞肺癌有效。

　　用克唑替尼治疗的非小细胞肺癌的发生率相当低，因为这些癌症中只有 1% 有ROS1重排并且只有 4-5% 具有ALK基因重排。此类 NSCLC 患者通常不吸烟并患有腺癌，已在一线接受克唑替尼治疗（仅适用于 ALK 阳性癌症），一旦肿瘤对克唑替尼产生耐药性并复发，可使用其他 TKI 抑制剂（如色瑞替尼）进行治疗.典型地，克里唑替尼抗性是伴随着次级突变ALK，所述的扩增ALK融合基因或其他致癌激酶如KIT或EGFR的异常活化.尽管克唑替尼偶尔会介导对携带激活性 MET 突变的 NSCLC 的影响，但它通常对治疗缺乏可能被克唑替尼抑制的致癌激酶的 NSCLC 无效。因此，现有证据表明，克唑替尼通过抑制 ALK、ROS1 或 MET 来介导其抗肿瘤作用，从而达到靶向作用。

　　在这里，我们建议克唑替尼也具有脱靶效应，该效应在基于顺铂的化疗的背景下变得明显，并且可用于治疗不具有任何经典克唑替尼靶标的非小细胞肺癌。事实上，当与 CDDP（或另一种化疗药物，如丝裂霉素 C）联合使用时，克唑替尼对皮下和原位 TC1 或 LLC1 NSCLC 以及更现实的 NSCLC 模型有效，这些模型要么由化学致癌作用诱导，要么由条件激活突变体 Kras 并删除了 Trp53。在所有这些模型中，克唑替尼与 CDDP 结合引起了抗癌免疫反应的迹象，如肿瘤 T 细胞浸润的增加所示。从系统中去除 T 淋巴细胞会削弱联合方案的功效。免疫浸润的分析表明有利于改善局部免疫紧张（如 CD8+CTL 与 Foxp3+的比例增加所示）Tregs)，以及肿瘤浸润性 T 细胞产生的 IFNα 增加。事实上，干扰素γ的中和足以消除克唑替尼和CDDP联合治疗的有益效果。更重要的是，克唑替尼和 CDDP 的联合作用导致 CTLA-4、PD-1 和 PD-L1 的肿瘤内上调。事实上，克唑替尼加 CDDP 使肿瘤对使用阻断 CTLA-4 和 PD-1（或单独 PD-1）的抗体的免疫疗法敏感，允许诱导持久的免疫反应，并完全治愈大多数已建立的原位非小细胞肺癌。

　　至于克唑替尼有利于诱导抗癌免疫反应的机制，似乎 (R)-克唑替尼 (TKI) 比其立体异构体 (S)-克唑替尼（nudix 水解酶 1 的抑制剂，NUDT1，一种核苷酸）更有效。泳池消毒酶）.通过同时抑制多种酪氨酸激酶（即 ALK、ROS1、MET 和 JAK2），(R)-crizotinib 与 CDDP（或丝裂霉素 C）联合在多种人和小鼠 NSCLC 中诱导 ICD 的所有分子和功能特征细胞系，即使这些细胞缺乏 ALK 或 ROS1 的激活突变。这是特定于药物组合的，这意味着克唑替尼、CDDP 或丝裂霉素 C 本身不会诱发 ICD；只有当克唑替尼与化疗药物联合使用时才能获得这种效果。去除 ICD 所需的任何已知 DAMP，包括 ANXA1、ATP、CALR 或 HMGB1，消除了克唑替尼加 CDDP 处理的 NSCLC 细胞在疫苗接种试验中引发抗癌免疫反应的能力。

　　在临床试验中，导致克唑替尼的批准NSCLC轴承ALK和ROS1激活染色体易位的一个子类别的治疗中，药物被通常相比，但不与，CDDP组合。因此，没有关于联合治疗在 NSCLC 中可能获益的信息。只有少数接受过克唑替尼治疗的ALK 重排 (ALK+)NSCLC对 PD-1 阻断有反应。临床前证据表明，ICD 诱导细胞毒剂（如奥沙利铂和环磷酰胺，尤其是联合使用时）可使 NSCLC 对 CTLA-4/PD-1 阻断敏感.重要的是，纳武单抗在对一线化疗有反应的非小细胞肺癌患者中特别有效，这表明这也可能适用于患者。此外，不同的化疗方案可以有利地与 ICB 联合用于治疗转移性 NSCLC。基于这些前提，可以尝试推断此处描述的小鼠模型中获得的结果来设计一项临床试验，其中 NSCLC 患者将接受标准化疗与克唑替尼联合（这与ALK和ROS1的状态无关)，其次是 ICB。值得注意的是，在小鼠中，克唑替尼可以安全地给药而没有任何明显的毒性，在血浆、肺组织和肿瘤中达到 10 μM 的浓度，这是在缺乏ALK重排的癌细胞中有效诱导 ICD 标志的剂量。此外，当克唑替尼水平降至检测限以下时，首先给予克唑替尼和化疗，一周后给予免疫治疗时，未观察到毒性。因此，PD-L1克唑替尼给药 2 天后肝脏中的 mRNA 表达增加，但一周后又恢复到基础状态。因此，序贯方案可以避免导致克唑替尼与靶向 PD-1 抗体纳武单抗共同给药的临床试验提前终止的毒性。

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