克唑替尼crizotinib和吉非替尼都被称为疏水性弱碱化合物

　　我们接下来关注药物的细胞药代动力学。克唑替尼（crizotinib）和吉非替尼都被称为疏水性弱碱化合物。这些弱碱能够自由穿过质膜和细胞内膜。这些化合物也可能在溶酶体中积累，这种积累是由细胞质和溶酶体之间的 pH 分配驱动的。溶酶体中的低 pH 值导致几种弱碱 TKI 质子化，从而阻止这些碱的跨膜并导致溶酶体中的积累。这导致溶酶体应激和 TFEB 转录因子协调溶酶体表达和调节（CLEAR 通路）的激活。这种积累也可能触发溶酶体胞吐作用的激活，从而溶酶体穿过微管，与质膜融合并将其货物释放到细胞外环境中。另一方面，厄洛替尼与细胞骨架相关。

　　值得注意的是，在 HCC827GR5 中，克唑替尼的细胞内浓度在不同治疗条件下存在显着差异，与克唑替尼单药治疗相比，联合治疗后浓度显着增加。尽管我们只能假设这种增加会产生临床相关的影响，但在我们的胰腺癌体内模型中，克唑替尼浓度的类似增加与相关的协同相互作用有关。通过添加巴弗洛霉素，在所有治疗条件下，克唑替尼的细胞内浓度降低至 1 pmol/μg 蛋白。这表明克唑替尼被隔离在溶酶体中并且这种组合可能影响溶酶体隔离的过程。

　　这种效应可能是由细胞质和溶酶体之间的 pH 分配改变引起的，正如在 MCF-7 细胞系中所显示的。两个隔室之间 pH 值差异的降低可能导致溶酶体中克唑替尼的螯合减少。添加厄洛替尼可能使 pH 值正常化，导致克唑替尼重新螯合。然而，使用 pH 敏感探针 pHrodoGreen 的活细胞显微镜检查显示亲本和 HCC827GR5 细胞系之间的基础 pH 水平没有差异。此外，在两种细胞系中，舒尼替尼都在溶酶体中积累，这表明两种细胞系都在进行溶酶体隔离。然而，HCC827 亲代细胞中克唑替尼处理后溶酶体的酸化可以解释细胞中克唑替尼的细胞内浓度较高，而组合后的 pH 评估由于溶酶体红色信号面积的大幅增加而变得复杂，因为正在进行的细胞凋亡。这些综合结果表明，HCC827GR5 细胞系的 pH 值没有永久性变化，舒尼替尼和克唑替尼的溶酶体积聚仍在发生。

　　我们结果的另一个解释可能是厄洛替尼对自噬的影响。多项研究表明，厄洛替尼和 EGFR-TKIs 对自噬诱导的总体影响。这种自噬诱导在 EGFR 突变和 EGFR 非依赖性细胞中均观察到。在自噬过程中，注定要分解的细胞室被膜包裹并与溶酶体融合。接下来，溶酶体中的蛋白酶分解细胞隔室。已经表明，随着溶酶体化合物的积累，溶酶体的 pH 值增加。反过来，溶酶体 pH 值的这种增加会阻止溶酶体蛋白酶的最佳功能，最终导致自噬受损。此外，溶酶体积累本身就足以激活自噬。转录因子 TFEB 在溶酶体积累时被激活，易位到细胞核并激活参与溶酶体生物发生、自噬和内吞作用的基因表达。因此，厄洛替尼与克唑替尼联合治疗可能会导致受损的自噬过程增强，从而导致细胞死亡增加。值得注意的是，先前的研究表明，自噬的增强与 p-AMPK (Thr172) 的增加和 p-mTOR 的减少有关 。然而，我们的磷酸化数据显示，与单一疗法相比，联合治疗后 HCC827GR5 细胞系中 p-AMPK 没有增加，p-mTOR 也没有大幅下降，这与这一假设相矛盾。

　　第三种解释可能是厄洛替尼与细胞骨架的关联干扰了微管追踪器上的溶酶体胞吐作用，导致与单药治疗相比，联合治疗后细胞内克唑替尼增加。然而，没有研究详细确定厄洛替尼与细胞骨架的相互作用及其对微管架的影响。现在克唑替尼的价格是多少？更多详情可咨询下方微信。