卡博替尼(Cabozantinib)治疗原发性骨肿瘤的研究

　　骨巨细胞瘤（GCTB）是一种非常罕见的肿瘤实体，由于缺乏已建立的细胞系和小鼠模型以及可用的原代细胞系的限制，因此很少进行检查。已经使GCTB的基质细胞负责侵袭性生长和转移，强调了癌症干细胞群体的存在。为了鉴定和靶向这种肿瘤起始细胞，从八份新鲜切除的GCTB组织中分离了基质细胞。通过集落和球体的形成，分化，迁移，MTT（3-（4,5-二甲基噻唑-2-基）-2,5-二苯基四唑溴化物）测定，免疫组化，抗体蛋白阵列，Alu原位检查了致瘤性杂交，FACS分析和异种移植到受精的鸡蛋和小鼠中。肿瘤性基质细胞的亚群形成球状体和集落，分化为成骨细胞，迁移至受伤区域并表达转移标记物CXC-趋化因子受体4型，表明其具有自我更新，侵袭和分化的潜能。与粘附生长的细胞相比，球形细胞中多能性，干性和癌症进展的标志物（包括CSC表面标志物c-Met）得到了增强。这种富含c-Met的亚群在受精的鸡蛋和小鼠中形成异种移植瘤。

　　卡博替尼（Cabozantinib）是一项II期试验中的c-Met抑制剂，它消除了CSC功能，具有比标准化学疗法更高的治疗效果。这项研究确定了c-Met+基质GCTB细胞内的致瘤性亚群，提示c-Met抑制剂cabozantinib可作为靶向消除不可切除或复发性GCTB的新治疗选择。

　　c-Met属于受体酪氨酸激酶，在细胞存活，生长，血管生成和转移中起关键作用。c-Met及其生理配体肝细胞生长因子（HGF）是正常哺乳动物发育所必需的，并且在器官形态发生过程中在上皮-间质相互作用中具有重要作用。通过的c-Met激活的细胞内信号级联包括RAS-MAPK和PI3K-AKT途径，以及NF-κB和的Wnt / GSK-3β/β连环蛋白信号传导。许多癌过表达c-Met，周围的基质过表达HGF。当前，对c-Met抑制剂卡博替尼的治疗潜力进行了深入研究。卡博替尼是c-Met和VEGFR-2信号传导的有效双重抑制剂。几个进展的肿瘤实体卡博替尼的临床疗效下的随机II期研究调查。2012年底，卡博替尼（Cometriq）被FDA批准用于治疗进行性甲状腺髓样癌的患者。卡博替尼显示出有希望预防前列腺癌扩散到骨骼，因为在进行骨扫描后肿瘤减少了，并且患者接受卡博替尼后骨骼疼痛减轻了。这些数据对于GCTB可能很重要，但是直到现在，卡波替尼尚未用于治疗原发性骨肿瘤的研究。

　　在本研究中，我们证明了从8个新鲜切除的GCTB标本中分离出的低代基质细胞的c-Met+亚群具有自我更新，分化和迁移的潜能，以及在体内形成肿瘤的能力。通过比较附着生长的c-Met低培养和球状c-Met高培养，我们确定了增强的多能性，茎干和进展，以及c-Met+种群的富集。最重要的是，cabozantinib强烈抑制了自我更新潜能，并在体内GCTB基质细胞的生长。因此，卡波替尼可被认为是针对不可切除或复发性GCTB靶向消除致瘤性基质亚群的一种有效的未来治疗选择。

　　为了进一步强调c-Met信号在源自GCTB的基质细胞存活中的作用，我们用c-Met抑制剂卡博替尼处理了三名不同患者的细胞，并比较了用细胞毒性药物甲氨蝶呤治疗的效果。卡博替尼显着降低了细胞数量和活力，而甲氨蝶呤的形态学改变和3-（4,5-二甲基噻唑-2-基）-2,5-二苯基四氮唑溴化物（MTT）分析显示，其效果微乎其微。可以预期该结果，因为GCTB的基质细胞被认为对化疗具有抗性。为了研究卡博替尼是否会影响自我更新的潜力，将未生长球状细胞或分别用卡博替尼和甲氨蝶呤治疗。7天后，对球状体进行拍照，并确定其体积。卡博替尼几乎完全消除了球体，而甲氨蝶呤的效果却微乎其微。通过使用菌落形成试验检查自我更新潜能，获得了相似的结果。在体内，用卡博替尼预处理基质细胞，然后在受精卵的CAM上进行移植，与未处理的对照细胞相比，可显着降低肿瘤的生长。值得注意的是，在用经卡博替尼预处理的细胞移植的卵衍生的七个胚胎中，有两个具有颅面缺陷，而在未用GCTB基质细胞移植的卵衍生的胚胎中未观察到。鸡胚的这种发育缺陷是相当少见的事件，我们还没有在与其他肿瘤实体和5000多个卵子同时进行移植实验的过程中观察到它。这些结果表明，经过预处理和洗涤的细胞所传递的卡博替尼的最低残留浓度已经干扰了c-Met依赖性信号传导途径，该途径不仅在CSC中起作用，而且在胚胎发育中也有作用，因此我们认为c-Met介导的干细胞信号传导负责GCTB基质细胞亚群的致瘤性。

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