INC280卡马替尼对EGFRTKI的耐药性研究作用

　　尽管EBC-CR3细胞系（源自EBC-CR1细胞）持续暴露于卡马替尼（INC280），但EGFR-TKI却未暴露于阿法替尼的细胞活力测定中。在Western印迹中，EBC-CR3显示了EGFR或MET活化的完全阻断，但是在阿法替尼治疗后AKT持续磷酸化。我们进行了qRT PCR和Sanger测序，以研究EGFR依赖阿法替尼的潜在机制。我们发现，在EBC-CR3细胞中PIK3CAmRNA表达增加，基因拷贝数增加，这与我们在其他细胞系中观察到的情况不同;

　　但是，我们在PIK3CA中未发现任何热点突变。经常观察到PIK3CA扩增，并可能在肺癌特别是鳞状细胞癌中发挥致病作用[。因此我们假设PIK3CA扩增是获得的对卡马替尼的耐药机制。为了证实这一假设，我们测试了BYL719对EBC-CR3细胞中PIK3CA抑制的功效，因为先前已经报道了BYL719的这种分子靶标。结果，在用BYL719单次处理后显示出抗性；然而，并发EGFR过度表达的细胞敏感BYL719在阿法在细胞生存力测定的存在。

　　尽管EBC-1和EBC-CR2细胞对BYL719和阿法替尼的联合治疗有抗药性，但它对EBC-CR1细胞表现出累加效应。此外，尽管MET信号持续存在，但BYL719与阿法替尼的组合仍能有效抑制AKT的磷酸化和RAS / MAPK途径失活。联合处理不能完全抑制EBC-1和-CR2上的AKT磷酸化。尽管在EBCCR3细胞中可能形成一个或多个菌落，但除PIK3CA扩增外，其他菌落中没有其他遗传修饰。这些结果表明，野生型PIK3CA扩增可能是卡帕替尼耐药癌症中对EGFR-TKI耐药的另一种机制。然而，组合疗法有效地克服在到TKI中的电阻MET中的额外的遗传改变的存在非依赖性方式。

　　生了对卡马替尼的耐药机制示意图。分别用0.1μmol/ L的阿法替尼，BYL719和BYL719处理EBC-CR3细胞72小时。具有阿法替尼的BYL719协同抑制EBC-CR3细胞的增殖。通过定量聚合酶链反应测量细胞系中PIK3CA的拷贝数。与其他细胞系和人类基因组DNA对照相比，PIK3CA在EBC-CR3细胞系中进行了扩增。分别用500 nmol / L的阿法替尼，1μmol/ L的BYL719或用500 nmol / L的阿法替尼处理EBC-CR3细胞24小时。BYL719与阿法替尼的组合完全抑制了AKT磷酸化。在具有MET的药物敏感性细胞系中扩增，细胞增殖和存活信号高度依赖于组成性活化的MET激酶，而没有配体结合和/或同二聚化。

　　此外，MET通过多种机制激活表皮生长因子受体（EGFR）信号通路。相反，MET途径不能充当生存信号，并且必须在耐卡马替尼的细胞中激活其他途径。我们证实了在MET依赖性NSCLC细胞系中对卡帕替尼具有抗性的三种不同机制。MET和EGFR之间的异源二聚化，EGFR和EGF样生长因子表达增加；和PIK3CA通过激活的EGFR依赖性PIK3CA刺激进行扩增，导致afatinib耐药。每种机制具有不同的分子特征和治疗策略。GAPDH，3-磷酸甘油醛脱氢酶；PI3K，磷酸肌醇-3-激酶；mTOR，雷帕霉素的哺乳动物靶标。现在卡马替尼的价格多少？更多详情可咨询下方微信。