为了确定卡马替尼（INC280）耐药的替代生存途径，通过3'-mRNA测序筛选了EBC-1，EBC-CR1，-CR2和-CR3细胞的基因表达。首先，我们通过层次聚类分析了RTK相关基因的表达。RTK相关基因被分为几个簇，并且在耐药细胞系中将近20％的RTK相关基因显着上调。根据3'mRNA测序的结果，与亲本细胞系相比，EBC-CR1，-CR2和-CR3中MET mRNA表达略有降低，而EGFR mRNA表达则有所增加。
然后我们证实与抗药性细胞系中的多个RTK相比，EGFR蛋白的磷酸化增加，但未观察到EGFR拷贝数的变化。上调最多的基因是KIT和EFEMP1。尽管KITmRNA高度上调，但在磷酸RTK阵列中未观察到KIT激活。相反，EGFR信号在mRNA和蛋白质水平均被激活。此外，与EGFR结合的EFEMP1可以激活下游信号并最终增加EGFR信号。这些结果表明，EGFR信号传导途径可能是MET的另一种途径。尽管在所有耐药细胞系中EGFR的激活都增加了，但对阿法替尼的细胞生存力分析表明，只有EBC-CR1仍然对阿法替尼单独敏感。
有趣的是，卡马替尼抑制EBC-1细胞中的EGFR激酶磷酸化。为了确定EBC-CR1细胞系中EGFR途径激活的机制，我们测试了多种EGFR配体（包括表皮生长因子[EGF]，双调蛋白，上皮调节蛋白，转化生长因子-α和HBEGF）的表达，并观察到HBEGF在EBC-CR1细胞中表达升高。为了进一步探讨HBEGF在EGFR激活中的作用，我们向EBC-1和EBC-CR1细胞系中添加了外源性HBEGF，发现HBEGF足以挽救MET依赖性NSCLC细胞系EBC-1中的MET抑制作用。
在EBC-CR1中，带有HBEGF的培养物比没有配体的培养物对EGFR的抑制作用更强（p <0.01）。与亲代细胞系不同，尽管持续的MET激酶活化，单用阿法替尼的治疗仍能有效抑制EGFR，AKT和ERK1 / 2的磷酸化。结果，EGFR激活高度依赖HBEGF作为EBC-CR1细胞中的主要存活信号。
在EBC-CR1中从间充质-上皮转化因子（MET）转变为表皮生长因子受体（EGFR）激酶途径。用阿法替尼处理EBC-1和抗性细胞系72小时。结果表示为平均值±标准偏差。在三个独立的实验中，通过定量逆转录聚合酶链反应测量肝素结合表皮生长因子样生长因子（HBEGF）的表达。与亲本和其他耐卡马替尼的细胞系相比，EBC-CR1细胞系中的HBEGF表达增加了。对于Western印迹，将EBC-1和EBC-CR1细胞用连续的10倍稀释液处理，范围从0.1到1μmol/ L的卡马替尼以1μmol/ L的浓度进行24小时。由于使用或不使用卡马替尼的阿法替尼治疗，EBC-CR1几乎完全依赖于下游信号传导。卡马替尼可有效抑制EBC-1细胞中AKT和ERK1 / 2的磷酸化。现在卡马替尼的价格多少？更多详情可咨询下方微信。
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