乐伐替尼/仑伐替尼和联合疗法使M‐MDSCs的比例适度增加

　　MDSCs是具有免疫抑制活性的CD11b +未成熟髓细胞的异质群体，并且被组织为早期（小鼠中定义较差），多形核（PMN-MDSC）和单核（M-MDSC）亚群。由于CD11b是髓样的标志物和NK细胞，Ly6C和Ly6G用于进一步关注MDSC。与对照组相比，Len6atinLy6G + PMN‐MDSCS与乐伐替尼（仑伐替尼）显着增加（占总有核细胞的19.6％±5.2％，p <0.05％），而对照组（占总有核细胞的2.8％±0.9％）显着增加。每组的代表性样品与单独的乐伐替尼相比，乐伐替尼+ PD-1与CD11b + Ly6CintLy6G +细胞比例显着降低至10.4％±4.3％细胞（p <0.05％），而乐伐替尼+ PD-L1则有适度的非统计学意义降低至14.4±2.2％。

　　相比之下，乐伐替尼和联合疗法使M‐MDSCs的比例适度增加，而联合疗法则进一步增加。 然后，如方法所述，通过使用抗原非特异性T细胞共培养测定法对随乐伐替尼治疗而增加的MDSC进行功能表征，因为表型表征是必要的，但不足以将其表征为MDSC。使用FACS从肿瘤中分离CD11b + Ly6CintLy6G +的MDSC，并与引发的同系CFSE标记的CD8+T细胞共培养。在高比例的MDSC：T细胞下，T细胞增殖受到明显抑制。随着MDSC：CD8 + T细胞比例的降低，T细胞增殖以剂量依赖的方式增加，从而证实了MDSC的活力和免疫抑制功能。

　　由于PMN-MDSCs的对照组或乐伐替尼天真小鼠的甲状腺，血液或脾脏中的微量成分很少，因此尝试对来自肿瘤和乐伐替尼天真小鼠的表型相似的粒细胞进行阴性对照会导致细胞产量低。对照粒细胞：T细胞的比例为1：1，证明对T细胞的增殖没有抑制作用（数据未显示）。 使用多重细胞因子测定法分析每个治疗组的代表性肿瘤裂解物。与对照组相比，所有单独或联合接受乐伐替尼的组均表现出粒细胞趋化因子（G-CSF，GM-CSF）的增加，并且由于乐伐替尼的抗VEGFR作用，VEGFA的代偿性增加，正如预期的那样。

　　所有治疗组均显示IL-2适度降低，这是导致T细胞分化/增殖的原因; IL-13降低了M2极化的巨噬细胞和MDSC的产生和免疫抑制功能.IFNγ也适度在接受乐伐替尼或联合疗法治疗的大多数小鼠中，这种作用增加。 乐伐替尼增加了小鼠和转移性ATC患者血液中MDSC的比例 由于MDSC源自骨髓和脾的骨髓生成，因此有可能在外周血中检测到，因此我们对从小鼠和一名ATC患者中分离的外周血白细胞（PBL）进行了流式细胞术，以确定与肿瘤浸润性MDSC的相关性。

　　乐伐替尼治疗后从原位ATC小鼠收集的血液显示CD11b + Ly6CintLy6G + PMN-MDSCs和CD11b + Ly6C + Ly6G-M-MDSCs显着扩增，尽管PMN‐MDSC的扩增最令人印象深刻。 尽管由于该病的稀有性以及最近才开始研究乐伐替尼的临床试验而使接受乐伐替尼进行ATC的患者稀少，我们还是从马萨诸塞州总医院高级甲状腺癌诊所中发现了一名患者，该患者开始接受乐伐替尼进行4C期转移性ATC于2017年5月作为临床试验NCT02657369的一部分。

　　在开始治疗前，治疗2个月和停药后8天（由于疾病进展）获得的PBL被评估为PMN-MDSC样细胞。在乐伐替尼之前几乎未检测到CD11b +CD33 + CD14-CD15 + PMN-MDSCs，随着乐伐替尼显着增加，然后在停药后降至治疗前水平。 为了评估MDSC在对乐伐替尼治疗的反应中的作用，我们与上述动物实验同时通过单独使用抗GR-1（抗Ly6C / Ly6G）抗体和与乐伐替尼联合治疗来执行MDSC耗竭。

　　在治疗结束时，与乐伐替尼（182.5±38.0 mm3），抗GR-1（187.2±17.8mm3）相比，乐伐替尼+anti-GR-1（124.9±21.6 mm3）的平均肿瘤显着减少，和对照（297.0±33.6 mm3）。 MDSC的流式细胞术证实PMN-MDSC和M-MDSC的抗Gr-1充分耗竭。 IHC在乐伐替尼和抗Gr-1治疗组中均显示CD8+T细胞和颗粒酶B显着增加，但在乐伐替尼+抗Ger-1治疗组中最令人印象深刻。如果您有需要购买仿制药乐伐替尼？更多详情可咨询下方微信。