达拉非尼和曲美替尼联合免疫刺激抗体治疗BRAF突变黑色素瘤

　　靶向治疗与 BRAF 和 MEK 抑制剂的组合已成为 BRAFV600E突变黑色素瘤患者的护理标准，但反应并不持久。此外，与单独治疗组相比，抗 PD-1 和抗 PD-L1 抗体 (Ab) 在严重预先治疗的转移性黑色素瘤患者中具有令人印象深刻的临床益处，以及达拉非尼、曲美替尼和抗 PD-1 的协同作用支持结合达拉非尼、曲美替尼和基于 PD-1 阻断的免疫疗法可能是治疗转移性黑色素瘤的一种有趣方法的观点。使用我们的同基因BRAFV600E小鼠模型针对黑色素瘤 (SM1)，我们测试了添加靶向 CD137 (4-1BB) 和/或 CD134 (OX40) 的免疫刺激性抗体是否会增强达拉非尼、曲美替尼和抗 PD-1 或抗 PD-L1 的抗肿瘤作用治疗。体外研究表明，达拉非尼、曲美替尼和抗 PD-1 联合组可增加 CD8+肿瘤浸润淋巴细胞 (TIL) 以及 CD4+T 细胞和肿瘤相关巨噬细胞 (TAM)。在达拉非尼、曲美替尼和抗 PD-1 治疗的组合中观察到 PD-L1 上调。达拉非尼、曲美替尼和抗 PD-1 与抗 CD137 或抗 CD134 的组合显示出优越的抗肿瘤作用，但五药组合并不优于四药组合。总之，达拉非尼、曲美替尼、抗 PD1 或抗 PD-L1 疗法的组合产生了强大的抗肿瘤活性，通过添加免疫刺激性抗体抗 CD137 或抗 CD134 进一步提高了抗肿瘤活性。我们的研究结果支持在 BRAFV600E突变转移性黑色素瘤患者中测试这些组合。

　　越来越多的证据支持将基于 BRAF 抑制剂的靶向治疗的显着反应率与晚期黑色素瘤患者免疫治疗的长期持久反应相结合的组合方法。这些组合应首先在临床前模型中进行探索，以测试治疗策略之间的潜在协同作用。先前已经表明，与达拉非尼和曲美替尼的组合相比，达拉非尼、曲美替尼和抗 PD-1 的联合治疗对已建立的 BRAFV600E突变鼠黑色素瘤 SM1 肿瘤具有更好的活性。PLX4720 是一种广泛使用的临床前化合物，类似于与曲美替尼联合使用的威罗菲尼 (PLX4032)。通过使用 BRAFV600E突变黑色素瘤的免疫活性小鼠模型，我们证明添加靶向 CD137 的激动剂 Ab 或检查点抑制剂抗 PD1/L1 显着提高了靶向治疗的抗肿瘤效果。达拉非尼、曲美替尼、抗 PD-L1 和抗 CD137（或抗 CD134）的四联疗法甚至比达拉非尼、曲美替尼和抗 CD137 或抗 PD-L1 更有效。

　　在先前报道的 CT26 小鼠肿瘤模型中，肿瘤内给予抗 CD137 和抗 PD-1 的组合增强了癌症治疗性免疫，这种效果可以通过 TIL 中 PD-1 和 CD137 的共表达来解释.PD-L1 表达与肿瘤对 CD137 共刺激疗法的耐药性相关的事实41支持将这两种药物联合使用的合理性。上一份报告评估了针对 SM1 单独和与 PLX4720 组合的不同单克隆抗体免疫疗法，并说明了单独抗 CD137 的显着抗肿瘤活性及其在先前 PLX4720 治疗下增强的抗肿瘤活性。未观察到抗 PD-1 Ab 的抗肿瘤活性，无论是单独使用还是通过先前的 PLX4720 治疗增强。在 SM-1 肿瘤模型中结合 BRAF 抑制和 PD-1 阻断时，与抗 PD-1 治疗产生组合效应的不同安排可能是导致不同结果的部分原因。

　　已经在临床前模型中探索了靶向治疗和免疫治疗的其他组合，例如 PLX4720 和抗 CTLA-4 Ab 治疗，PLX4720 与 CTLA-4 阻断的抗肿瘤作用没有进一步增加。据我们所知，以前没有报告描述过达拉非尼和曲美替尼联合抗 PD-L1 和/或抗 CD137 Ab 的活性，也没有关于 BRAF 和 MEK 抑制剂与免疫疗法（如抗-CTLA4 或抗 PD-1/L1，尽管几项 I 期临床试验正在进行中。

　　在进一步确定靶向治疗和免疫治疗的最佳组合时，我们将达拉非尼和曲美替尼与抗 PD-L1 加抗 CD137、抗 CD137 加抗 CD134、抗 PD-L1 加抗 CD134 或所有五种结合代理一起。临床前研究表明，通过激动剂抗 CD134 Ab 连接 CD134 可以驱动强大的 T 细胞介导的抗肿瘤免疫以及用激动剂抗 CD134 Ab 结合 IL-2 增强肿瘤免疫疗法进行治疗。然而，没有报道描述 BRAF 和 MEK 抑制剂与抗 CD134 Ab 的组合。我们得出的结论是，最有效的治疗组合是包括抗 PD-L1 Ab 以及在包含达拉非尼、曲美替尼、抗 PD-L1 和抗 CD37 或抗CD134 没有提供任何额外的好处。联合多种药物的潜在缺点包括可能增加免疫相关不良事件 (irAE) 或重叠毒性（即肝脏）的发展，这可能会限制可以从联合癌症治疗中完全受益的患者数量。

　　我们决定专注于表征达拉非尼、曲美替尼和抗 PD-1 组合的肿瘤微环境的细胞成分，因为这种药物组合的临床开发更先进。我们评估了体内效应 T 细胞的频率。先前的报告记录了在接受 BRAF 抑制剂和 PD-1疗法治疗的黑色素瘤患者的活检中 TIL 数量增加，在那些具有更多克隆性 TCR 库的患者中反应更好。CD8+之间建立的关联, PD-1 和 PD-L1 细胞密度在接受抗 PD-1 治疗的患者的基线活检中以及 PD-1 和 PD-L1 细胞之间物理相互作用的证据表明增殖的 CD8+肿瘤消退中的 T 细胞可能伴随着 PD-L1 表达的增加。在我们的 SM1 模型中，我们观察到与单独的抗 PD-1 治疗相比，联合使用达拉非尼、曲美替尼和抗 PD-1 的CD8+T 细胞和 PD-L1 表达均增加，这与 PD-L1 表达相关肿瘤驻留细胞和 T 细胞活化与治疗结果，其他人在 PD-1 免疫检查点释放后已经证明了这一点或用过继细胞转移 (ACT) 处理从 pmel-1 小鼠获得的 gp100 TCR 转基因活化脾细胞，同时使用达拉非尼和曲美替尼。抗 PD-/1L1 阻断与 BRAF 抑制剂一起导致 PTEN-/- 背景下同系 BRAF 突变黑色素瘤模型中 TIL 的数量和活性显着增加，这进一步证明了联合 BRAF 靶向药物之间的协同作用治疗和免疫检查点阻断。关于 TILs 在 SM1 肿瘤模型中的活性，已发表的数据并未显示单独使用 pmel-1 ACT 或与达拉非尼、曲美替尼或这两种药物联合使用时，干扰素-γ (IFNγ) 的分泌没有任何差异，尽管结果不同。

　　我们的研究表明，通过添加靶向 CD137 的激动剂 Ab 或检查点抑制剂抗 PD1/L1，达拉非尼和曲美替尼的抗肿瘤活性得到改善，并证明了基于达拉非尼加曲美替尼加抗 PD-L1 的靶向治疗的协同作用增加和抗 CD137 或抗 CD134。可以观察到效应和辅助 T 细胞的增加与 PD-L1 与达拉非尼、曲美替尼和抗 PD-1 的上调一致。这伴随着与 Treg、MDSC 和 TAM 增加一致的肿瘤微环境的变化。微信扫描下方二维码了解更多：