索拉菲尼/索拉非尼诱导甲状腺癌细胞死亡

　　去分化或间变性甲状腺癌患者目前缺乏适当的治疗选择。作为替代策略，激酶抑制剂是最有前途的新药剂之一。BRAF 和多激酶抑制剂索拉非尼（索拉菲尼）已经在 III 期临床试验中显示出对甲状腺癌患者的抗肿瘤作用。在这项研究中，我们旨在更好地表征索拉非尼对具有不同组织学来源和不同BRAF 的甲状腺癌细胞的分子效应和功效突变状态。分析受索拉非尼影响的不同信号通路可能有助于帮助选择更具体的治疗方案，同时减少副作用。用索拉非尼治疗了来自具有野生型或突变激活 BRAF 的间变性、滤泡状和乳头状甲状腺癌的 12 种甲状腺癌细胞系。然后综合分析生长抑制、细胞周期停滞、细胞死亡诱导和细胞内信号通路的抑制。

　　方法

　　MTT法分析细胞活力，碘化丙啶染色后流式细胞术评估细胞周期。通过乳酸脱氢酶释放测定、半胱天冬酶活性测定和亚G1峰测定来评估细胞死亡。在斑点印迹和蛋白质印迹分析中分析细胞内途径的抑制。

　　结果

　　索拉非尼（索拉菲尼）抑制所有甲状腺癌细胞系的增殖，IC50 值范围在 1.85 和 4.2 μM 之间。来自带有突变BRAFV600E等位基因的乳头状癌的细胞对索拉非尼的敏感性略高于带有野生型BRAF 的细胞。细胞周期分析和半胱天冬酶测定显示所有细胞系中都存在索拉非尼依赖性细胞凋亡诱导，而乳酸脱氢酶释放增加表明细胞膜破裂。除了抑制 AKT 和受体酪氨酸激酶外，索拉非尼治疗还导致对各种 MAP 激酶的快速抑制。

　　结论

　　索拉非尼（索拉菲尼）抑制甲状腺癌细胞的多种细胞内信号通路，导致细胞周期停滞和细胞凋亡的启动。索拉非尼对所有甲状腺癌细胞系均有效，无论其肿瘤亚型来源或BRAF状态如何，证实索拉非尼对任何亚型去分化甲状腺癌患者都有治疗益处。抑制甲状腺癌细胞中索拉非尼的单个细胞内靶标可能允许开发出副作用更少的更具体的治疗干预。

　　在这里，我们详细分析了 BRAF 和多激酶抑制剂索拉非尼（索拉菲尼）在具有和不具有激活BRAFV600E突变的各种组织学亚型的甲状腺癌细胞系中的激酶抑制、对细胞周期和细胞凋亡诱导的影响。研究了索拉非尼对各种细胞内信号分子的影响，以评估去分化甲状腺癌患者的更具体的治疗选择。我们评估了本研究中使用的所有 12 种细胞系的BRAFV600E突变状态。激活的BRAFV600E仅在三种乳头状细胞系中的两种（BHT101 和 B-CPAP）和四种细胞系中的一种（SW1736）中检测到突变，如先前检测和报道的。HTh7、C643 和 HTh83 间变性细胞系、TPC 乳头状细胞系和 FTC133、FTC236、FTC238、ML1 和 TT2609 滤泡细胞系仅含有BRAF 的野生型等位基因。这些发现与实验和病理证据非常吻合，表明BRAF突变参与了约 50% 的 PTC 的发病机制以及 PTC 向 ATC 的进展，但在 FTC 中没有发生BRAF突变 。

　　索拉非尼（索拉菲尼）在 48 小时治疗期内抑制了所有细胞系的增殖。据我们所知，我们的报告是关于索拉非尼不仅对源自 PTC 和 ATC 的细胞系，而且对源自 FTC 的细胞系的抑制作用的第一份报告。这与索拉非尼在碘难治性甲状腺癌患者中进行的 III 期 DECISION 试验的近期临床发现非常一致，其中在所有临床和遗传生物标志物亚组中都发现了索拉非尼对无进展生存期的积极影响。相比之下，Kloos 等人报告了 PTC 患者对索拉非尼的临床反应优于 FTC 患者（PTC 部分反应患者为 15%，约 65% 患者病情稳定，FTC 患者无部分反应且病情稳定的患者为 80%的患者中，25% 的患者患有 ATC 稳定疾病）。本研究中研究的各种细胞系中索拉非尼的 IC50 值范围为 1.85 μM 至 4.2 μM，这对应于可达到的血浆水平的较低范围。在 I 期试验期间，每天口服 400 毫克索拉非尼或每天两次 200 毫克索拉非尼导致患者的平均血浆水平为 20 μM 。两种乳头状细胞系 BCPAP 和 BHT101 与BRAFV600E突变对索拉非尼的 IC50 值最低，而 TPC1 乳头状细胞系的 IC50 值略高，该细胞系没有BRAFV600E突变，但有 RET/PTC1 重排。源自 FTC 和 ATC 的细胞系在本研究中的反应相似，IC50 值在相对较窄的范围内证明了这一点。FTC 和 ATC 细胞系的这些 IC50 值略高于 PTC 细胞系的 IC50 值，但仍与患者达到的较低血浆浓度范围相当。最近，科恩等人报道了索拉非尼与睡茄素 A 在 B-CPAP 和 SW1736 甲状腺癌细胞系中的协同作用。单独使用索拉非尼治疗的 IC50 值为 6.3 μM (B-CPAP) 和 7.6 μM (SW1736)。尽管我们报告的 IC50 值略低，B-CPAP 为 1.85 μM，SW1736 为 3.25 μM，但它们处于相同数量级，BCPAP 是更敏感的细胞系。

　　总之，我们的结果表明 BRAF 和多激酶抑制剂索拉非尼（索拉菲尼）对甲状腺癌细胞的细胞内信号通路表现出多种抑制作用，并导致细胞死亡和细胞周期停滞。由于索拉非尼对所有甲状腺癌细胞系均有效，无论其组织学来源或是否存在激活的BRAF突变，这些体外数据与迄今为止从临床试验中用索拉非尼治疗的各种甲状腺癌亚型患者收集的数据一致.我们的数据支持这样一个假设，即索拉非尼可能对所有组织学亚型的去分化甲状腺癌有效，而不管它们的BRAF地位。本研究中描述的索拉非尼在甲状腺癌细胞中的细胞内靶标可能允许开发更具体的治疗干预，并且副作用更少。微信扫描下方二维码了解更多：