依鲁替尼(ibrutinib)在胶质母细胞瘤中表现出抗肿瘤活性

　　胶质母细胞瘤 (GBM) 是成人中最常见和最具侵袭性的原发性脑肿瘤。依鲁替尼（ibrutinib）是一种布鲁顿酪氨酸激酶 (BTK) 抑制剂，是一种用于治疗多种癌症的新型抗癌药物。在本研究中，我们旨在确定依鲁替尼对 GBM 的作用。

　　方法

　　通过使用细胞活力、集落形成和 5-乙炔基-2'-脱氧尿苷 (EdU) 测定来确定细胞增殖。通过流式细胞术分析细胞周期和细胞凋亡。通过伤口愈合试验和跨孔迁移试验评估细胞迁移能力。ATG7 表达被Atg7转染抑制-特异性小干扰RNA。通过用表达组成型活性 Akt (CA-Akt) 的质粒转染细胞来实现活性 Akt 蛋白的过表达。进行透射电子显微镜检查以检查细胞中自噬体的形成。使用免疫荧光和蛋白质印迹分析来分析蛋白质表达。进行裸鼠肿瘤异种移植和免疫组织化学以评估依鲁替尼对体内肿瘤生长的影响。

　　结果

　　依鲁替尼（ibrutinib）抑制细胞增殖和迁移，并诱导 LN229 和 U87 细胞凋亡和自噬。活性 Akt 蛋白的过表达降低了依鲁替尼诱导的自噬，而通过 LY294002 处理抑制 Akt 增强了依鲁替尼诱导的自噬。3-甲基腺嘌呤 (3MA) 或Atg7靶向小干扰 RNA (si-Atg7)对自噬的特异性抑制增强了依鲁替尼在体外和体内的抗 GBM 作用。

　　结论

　　我们的结果表明，依鲁替尼（ibrutinib）发挥显着的抗肿瘤作用，并通过 GBM 细胞中的 Akt/mTOR 信号通路诱导自噬。自噬抑制促进伊布替尼在 GBM 中的抗肿瘤活性。我们的发现为抗癌剂与自噬抑制剂联合治疗恶性胶质瘤的作用提供了重要的见解。

　　在目前的治疗方案下，GBM 的不良预后使得开发新的治疗剂成为必要。在目前的研究中，我们探讨了依鲁替尼在 GBM 中的潜在抗癌作用。我们的结果表明，依鲁替尼确实在 GBM 中具有明显的抗癌潜力。此外，我们还证实依鲁替尼通过靶向 Akt/mTOR 通路诱导自噬。最后，我们提供了证据表明自噬的阻断可以增强依鲁替尼在体外和体内对 GBM 的影响。

　　自噬通常被认为在生长因子停用期间或在代谢压力下（例如，伽马辐射、暴露于毒性刺激和化学疗法）促进癌症存活。这个过程不仅在肿瘤发生的不同阶段而且在疾病期间都起着重要作用，创造了一个促进肿瘤发生的微环境。然而，在某些细胞环境中，据报道自噬可能通过诱导自噬细胞死亡来抑制肿瘤发生。因此，目前对肿瘤发生中自噬的看法是一把双刃剑，既可以作为肿瘤抑制因子，也可以作为启动子。这个问题正受到越来越多的科学关注。最近，许多癌症治疗方法表明，当肿瘤细胞接受靶向治疗时，自噬可以被激活并保护肿瘤细胞，例如费城染色体阳性细胞和甲磺酸伊马替尼、乳腺癌和曲妥珠单抗、前列腺癌。癌症和 Src 家族激酶抑制剂，以及前列腺癌和蛋白酶体抑制剂。自噬相关基因 ATG 在自噬的几个离散但连续的步骤中起作用。自噬诱导后，部分 LC3（Atg8)-I(LC3-I)在细胞质中均匀转化为LC3-II，与自噬体膜紧密结合，在细胞质中形成环状结构。LC3 表达与 GBM 患者的存活率和体能状态呈正相关，而在体能评分正常的患者中，低 LC3 表达与更好的存活率相关。治疗 GBM 最有效的药物 TMZ 和自噬抑制剂 [例如，氯喹 (CQ) 及其类似物] 的组合在治疗方法的合理开发中引起了关注，并且正在作为 GBM 治疗进行临床试验。这些表明自噬可能作为对 GBM 治疗的细胞反应而被激活。在目前的研究中，我们证实自噬是由依鲁替尼诱导的，这由 TEM 和免疫细胞化学确定。蛋白质印迹分析显示，依鲁替尼在两个独立的 GBM 癌细胞系中以浓度和时间依赖性方式增加 LC3-II 蛋白水平。因此，自噬可能确实作为对 GBM 治疗的细胞反应而被激活。

　　总之，依鲁替尼（ibrutinib）对 GBM 细胞具有深远的抗肿瘤作用。我们首次证明依鲁替尼在体外和体内诱导 GBM 细胞自噬。此外，我们清楚地证明了依鲁替尼（ibrutinib）通过似乎涉及抑制 Akt/mTOR 信号通路的过程诱导自噬细胞死亡。当自噬被Atg7敲低或 3MA 治疗抑制时，依鲁替尼的细胞毒性增强。我们的发现为使用抗癌剂与自噬抑制剂联合治疗恶性胶质瘤提供了重要的见解。这些观察结果将有助于开发新的化疗药物，并通过在正确的背景下靶向自噬来设计治疗 GBM 的新策略。微信扫描下方二维码了解更多：