尽管最近在使用靶向疗法治疗转移性黑色素瘤方面取得了进展，但BRAF和NRAS野生型肿瘤患者的选择仍然有限。BRAF/NRAS野生型黑色素瘤占所有黑色素瘤病例的 13-26%并且通常以高 C > T 突变负荷、功能突变和丧失功能为特征。NF1缺失，激活KIT突变。在这种疾病中也观察到KIT、CCND1和TERT 的扩增。达卡巴嗪化疗是此类分子黑色素瘤患者的标准治疗方法，但晚期疾病的缓解率令人失望。最近，已经针对这种疾病部署了免疫疗法，在一部分患者中引起了显着的反应，但在大多数情况下，仅观察到与化疗相比生存率略有提高。在携带KIT 的BRAF/NRAS野生型黑色素瘤患者亚组中突变，KIT 抑制剂显示出一些疗效，特别是在外显子 11 或 13 突变的患者中。然而，这种治疗方式仅适用于 10-22% 的KIT突变型BRAF/NRAS野生型疾病患者。总的来说，转移性BRAF/NRAS野生型黑色素瘤患者的生存率仍然低迷。
曲美替尼（迈吉宁）（一种竞争性 MEK1/2 抑制剂）单独或与 BRAF 抑制剂联合治疗显着提高了BRAF突变黑色素瘤患者的生存率。此外，一些患有NRAS突变疾病的患者已被证明对基于 MEK 抑制剂的治疗有反应。尽管在曲美替尼的 1 期临床试验中描述了BRAF/NRAS野生型黑色素瘤患者的部分反应，但尚未在该疾病亚类中充分探索该疗法的有效性。最近，尼桑等人显示曲美替尼有效抑制BRAF/NRAS野生型黑色素瘤细胞系中的细胞生长和 ERK 信号，这些细胞系失去了 NF1，一种 RAS 信号的负调节因子。由于 56-76% 的BRAF/NRAS野生型黑色素瘤不携带NF1的功能丧失突变，我们研究了保留 NF1 表达的细胞系对曲美替尼（迈吉宁）的敏感性。
我们收集了 25 个源自患者的黑色素瘤细胞系，并确定了它们对一组 19 个黑色素瘤癌症基因的突变状态。我们的集合包括 9 个携带BRAF激活突变的细胞系和 16 个BRAF/NRAS野生型细胞系。在暴露于 9 种不同递增剂量的曲美替尼（范围 0.08-10 nM）6 天后，使用基于核酸的检测方法 Syto60 评估每个细胞系对曲美替尼（迈吉宁）的敏感性。该测定提供了对细胞活力的可靠估计，并且与活细胞测定一致。所有BRAF/NRAS野生型黑色素瘤系显示出纳摩尔范围内曲美替尼的 IC50，这与平行测试的BRAF突变细胞系的 IC50 相当（平均 IC50 ± 标准误差平均值 = 2.54 nM ± 0.85 和 2.46 nM ± 1.05分别用于BRAF/NRAS野生型和BRAF突变的黑色素瘤；通过两个有尾未配对t检验P = 0.96）。与针对曲美替尼敏感性筛选的 316 个癌细胞系的 IC50 相比，BRAF/NRAS野生型黑色素瘤系被评为高度敏感，表明利用 MAPK 途径是这些细胞系的内在特征黑色素瘤。这些结果证实并扩展了最近一项研究的有效性，该研究表明BRAF/NRAS野生型黑色素瘤细胞系对曲美替尼敏感，并表明它们对 MEK 抑制作用与具有BRAF突变的黑色素瘤一样敏感。进一步分层BRAF/NRAS对于我们细胞系集合中的野生型黑色素瘤，我们通过蛋白质印迹和测序评估了 NF1 状态。通过蛋白质印迹分析的 16 种BRAF/NRAS野生型细胞系中有9 种显示无法检测到 NF1 蛋白水平，而 7 种表达 NF1 蛋白。值得注意的是，表达 NF1 蛋白的 7 种BRAF/NRAS野生型黑色素瘤细胞系对曲美替尼表现出与无法检测到 NF1 蛋白的细胞系相似的敏感性（对于 NF1 阳性和 NF1-分别为阴性黑色素瘤；P = 0.47 通过两个有尾未配对t检验）。为了确认曲美替尼（迈吉宁）在不同 NF1 表达状态的细胞系中抑制 MEK 的有效性，我们测量了磷酸化 ERK 的水平，磷酸化 ERK 是 MAPK 途径的下游效应器。用递增剂量的曲美替尼 (0.01–10 nM) 治疗显示，在所有测试的细胞系中，1 和 10 nM 曲美替尼的磷酸化 ERK 水平降低。然后我们测量了 ERK 下游转录目标的表达水平：ETV5和PHLDA1（见数据 S1）。Trametinib在 3/4 和 4/4 细胞系中分别诱导ETV5和PHLDA1水平显着降低。总体而言，这些结果表明曲美替尼诱导 ERK 通路的功能性下调，在BRAF/NRAS野生型黑色素瘤细胞系中，表达 NF1 蛋白的细胞系也可以定义为对 MEK 抑制敏感。
总之，我们表明BRAF/NRAS野生型黑色素瘤对 MEK 抑制剂曲美替尼（迈吉宁）高度敏感，并且仅 NF1 蛋白表达的丧失不会对敏感细胞系进行分层。总体而言，我们的研究结果要求进一步研究曲美替尼在BRAF/NRAS野生型黑色素瘤中的疗效。鉴于BRAF/NRAS野生型黑色素瘤的治疗选择有限，曲美替尼（迈吉宁）可能是该疾病亚类患者的有用治疗工具。微信扫描下方二维码了解更多：
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