如何恢复易瑞沙/吉非替尼的治疗能力

　　非小细胞肺癌 (NSCLC) 约占报告的肺癌病例的 85%。对表皮生长因子受体-酪氨酸激酶抑制剂 (EGFR-TKI)如吉非替尼（易瑞沙）靶向治疗的获得性耐药并不少见。因此，探索恢复吉非替尼敏感性的新策略至关重要。假设 microRNA (miRNA) 在转录水平上负调控其基因靶标，推测 miRNA 模拟物可能会降低 EGFR 的表达、活性和信号转导，从而实现肿瘤部位对吉非替尼诱导的细胞毒性的敏感性。事实上，越来越多的证据表明，操纵内源性 miRNA 水平不仅减弱了 EGFR/PI3K/Akt 磷酸化级联反应，而且还恢复了细胞凋亡。实验诱导的吉非替尼耐药性的体外模型，并在异种移植模型中引起肿瘤消退/缩小。这些数据与临床数据一致，表明肿瘤组织和血液中 miRNA 的差异表达谱与药物反应和总生存期密切相关。此外，另一系列研究表明，多种天然化合物的化学预防作用可能涉及 miRNA。本综述旨在讨论与最近发现的 EGFR-TKI 耐药相关的 miRNA 的治疗能力，包括慢性药物暴露和突变。

　　可逆 EGFR-TKI，如吉非替尼（易瑞沙）和厄洛替尼，被认为是携带 EGFR 突变的晚期 NSCLC 患者的一线治疗药物。不幸的是，已知 EGFR-TKI 的治疗功效受到 EGFR 突变的阻碍。激活突变，例如外显子 19 中的缺失和外显子 21 中的氨基酸取代，包括有据可查的 L858R 点突变，可提高 EGFR 的内在酪氨酸激酶活性，这种作用确立了用 EGFR-TKI 治疗以减少竞争性结合的基本原理三磷酸腺苷 (ATP)。值得注意的是，这些突变已被临床证明在对吉非替尼有反应的患者的 NSCLC 标本中很明显。然而，外显子 20 的插入和 T790M 错义突变被认为是赋予 NSCLC EGFR-TKI 耐药性的早期遗传事件。据认为，残基 790 处苏氨酸到甲硫氨酸的取代会增加 EGFR ATP 结合口袋的空间位阻，从而阻止吉非替尼的结合，同时有利于 ATP 的对接。结构分析表明，D770_N771insNPG 亚型的 ATP 结合域未发生改变，D770_N771insNPG 亚型是表现出活性激酶活性的外显子 20 插入突变体之一 。有趣的是，厄洛替尼降低了 EGFRThr1068、AktSer473和 MAPKThr202的磷酸化水平和增加的凋亡细胞死亡测量为 Bim 和裂解 BID007 细胞中的 PARP，其中包含外显子 20 的 A763_Y764insFQEA 变体。这一观察结果与 A763_Y764insFQEA 阳性患者表现出对厄洛替尼的药物反应的临床数据一致，尽管导致这些相互矛盾的发现的潜在机制尚不清楚。

　　在不同的 NSCLC 细胞系中观察到吉非替尼（易瑞沙）敏感性的恢复，这些细胞系长期暴露于 miRNA 刺激下的吉非替尼。最近有报道称，miR-34a 逆转了 HCC827 细胞中由肝细胞生长因子 (HGF) 和吉非替尼共同孵育诱导的吉非替尼耐药性。这一概念得到了数据的充分支持，该数据显示 miR-34a 恢复了以凋亡细胞百分比衡量的细胞凋亡和裂解 PARP，并降低了总和磷酸化 MET 的蛋白质丰度。体内一致的发现揭示 miR-34a 与吉非替尼干预联合诱导吉非替尼耐药肿瘤消退，这种影响可归因于降低 MET 和磷酸化 EGFRTyr1068 的表达。尽管 MET 基因扩增仅在 11% 的 NSCLC 患者中报道，但 miR-34a 对 MET 的抑制可能为这些患者提供有希望的治愈解决方案。微阵列分析已经确定，慢性吉非替尼暴露增加了 A549 克隆中 25 种 miRNA 的表达，同时抑制了其他 18 种；这种差异表达谱与吉非替尼的IC50增加 3 倍有关。与 miR-7 在所研究的其他 miRNA 成员中表现出最显着的表达变化（即降低 14 倍）的发现一致，用 miR-7 转染消除了 EGFR 的升高并恢复了暴露于长期递增剂量的吉非替尼。

　　从获得性吉非替尼（易瑞沙）耐药性实验模型中获得的数据也支持了 miRNA 的促凋亡能力。用 miR-138-5p 模拟物转染在 H1975 细胞中诱导了对吉非替尼的显着致敏反应，这与 6 个月的吉非替尼暴露使 miR-138-5p 表达降低 10 倍的观察结果一致。与 miR-146a 模拟物孵育提高了通过 PI 荧光染色测量的凋亡细胞核数量和 caspase 3/7 的活性，同时减轻了H1975细胞中 EGFRTyr1173和 AktSer473 的磷酸化，尽管这些影响相对于诱导的那些影响不那么明显通过靶向 EGFR 的小干扰 RNA (siRNA) 。值得注意的是，在 miR-146a 处理后，EGFR 的总蛋白含量同时降低，这意味着 EFGR 是 miR-146a 的调节靶点。此外，与正常肺组织相比，NSCLC 样本中 miR-146a 的表达低约 63%，而 III/IV 期 NSCLC 患者中 miR-146a 的低表达明显，因此表明 miR-146a 在NSCLC 的进展。最近的证据还表明，miR-146a 在转录物和蛋白质水平上诱导了对胰岛素受体底物 2 (IRS2) 的直接抑制，IRS2 是细胞代谢中必不可少的衔接蛋白。考虑到晚期肺癌样本中 miR-146a 表达受损的事实，通过增加内源性 miR-146a 水平来灭活代谢/凋亡信号传导的策略可能会使患者重新对吉非替尼治疗敏感。证实了临床肺癌标本中 miR-200c 表达降低的观察结果，在 H460 细胞中过表达 miR-200c 后，凋亡细胞的百分比增加。这些结果意味着 miRNA 操纵细胞凋亡途径的能力可能为重建 EGFR-TKI（如吉非替尼）的治疗功效提供高转化价值。微信扫描下方二维码了解更多：