ROS1重排肺癌对克唑替尼(crizotinib)耐药新机制

　　ROS1染色体重排的非小细胞肺癌（NSCLC）患者受益于ROS1抑制剂克唑替尼（crizotinib）的治疗。关于ROS1 + NSCLC的耐药机制谱方面的数据有限。为了描述获得性耐药的机制，我们从克唑替尼上进行性肿瘤病变的活检组织中分析了肿瘤样品。

　　通过SNaPshot测序在患有ROS1阳性NSCLC的患者的肿瘤样本中通过SNaPshot测序鉴定了KIT原癌基因受体酪氨酸激酶（KIT）（p.D816G）的激活突变，该患者通过荧光原位杂交鉴定，其疾病在最初应答后就进展克唑替尼。体外研究包括通过qRT-PCR评估KITmRNA表达，通过定点诱变修饰的慢病毒质粒转导Ba / F3细胞和NSCLC细胞系，免疫印迹和MTS细胞增殖测定。

　　结果：

　　KITD816G是一种激活突变，可诱导自身磷酸化和细胞增殖。突变的KITD816G受体在ROS1 + NSCLC细胞系中的表达导致组成性激活的KIT，如通过KIT受体的磷酸化所测量的。KITD816G的表达使HCC78和CUTO2细胞系对克唑替尼具有抗性，只有克唑替尼和ponatinib对ROS1和KIT的双重抑制才能使细胞对增殖抑制再敏感。在ROS1 +细胞系中观察到的致癌转换不是即时的，需要ROS1的药理学灭活。

　　结论：

　　功能获得性体细胞突变激活KIT是ROS1重排NSCLC中对克唑替尼耐药的新机制。与先前确定的EGFR或RAS信号转导途径相似，该旁路信号转导途径可作为ROS1依赖性的耐药机制，并且有可能被KIT抑制剂靶向。

　　在这里，我们描述了在ROS1 + NSCLC患者中对克唑替尼耐药的新机制。在耐克唑替尼的ROS1 +肿瘤样品的基因组DNA中鉴定出的KITD816G突变，并通过RT-PCR对mRNA进行测序证实，被认为是一种体突变，因为用克唑替尼进行药物治疗后获得了该突变，因为它不存在于克唑替尼治疗前。处理样品。我们证明了KITD816G突变（先前已被确定为GIST的第二抗性突变）本身具有致癌性，因为它表明它可以促进细胞中的自磷酸化和增殖。我们证明，KIT中的激活突变可以在体外驱动耐药性使用两种不同的ROS1 +细胞系，证明通过在crizotinib中添加KIT抑制剂可以克服这种细胞耐药性。这种抗药性机制增加了在患者或细胞系模型中观察到的获得性克唑替尼抗药性的清单。KITD816G用作耐药的旁路信号传导机制，与针对RAS和EGFR所述的机制相似，因为它独立于ROS1发生。KIT基因扩增已观察到与处理过的克唑替尼旁路信号传导在ALK +肺癌的机构。尽管KIT激酶结构域突变是在携带KIT的肿瘤中获得对伊马替尼耐药的常见机制激活突变，这是KIT激活突变的第一个实例，可作为对其他癌基因的旁路信号传导抗性机制。

　　这种抵抗的旁路机制与尽管存在ROS1抑制剂但仍保持ROS1抗性的ROS1抗性突变相反。因为它可能要求一个更有效的抑制剂是否可用于克服抗性（在抗性突变的情况下）癌基因依赖性和非依赖性电阻之间的这种区别是重要的，或是否将需要联合疗法（在的情况下旁路信令机制）。KITD816G诱导的耐药性在两种ROS1细胞系之间显着不同，表明细胞环境可能在致癌基因类别之外发挥重要作用。尽管两种ROS1 +细胞系均表达KITD816G需要双重ROS1和KIT抑制来恢复药物敏感性，ROS1抑制后对细胞信号的解剖提示了双重抑制的必要性有两个不同的原因。在CUTO2细胞中，ROS1和KIT致癌信号均保持活跃，并可以参与下游信号（例如MAPK）。在HCC78细胞中，克唑替尼的抑制作用会在一段时间内诱导从ROS1到KIT的依赖性变化。值得注意的是，在克唑替尼治疗72小时后进行药物冲洗后，ROS1磷酸化和通过SHP2发出的信号重新结合到CUTO2细胞中，而不是HCC78细胞中，并与依赖于KIT的开关相关。先前已经针对BCR-ABL癌基因描述了这种激酶抑制剂诱导的细胞重编程。值得注意的是，仅在克唑替尼后的患者肿瘤样品中观察到了KIT基因表达，而在治疗前的肿瘤样品中未观察到。这出现KIT基因表达可以通过克隆选择或去阻遏任一发生KIT以下ROS1抑制基因表达。

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