艾曲波帕/艾曲泊帕在体外和体内均表现出抗肿瘤作用

　　为了检测用艾曲波帕（艾曲泊帕）处理的RAW264.7巨噬细胞的上清液处理过的HUVEC的迁移能力，如前所述进行了刮擦试验。用移液管吸头刮擦细胞单层以形成直线“刮擦”，然后将细胞与含有50％上苯丙酸处理过的（10μmol/ L）或未上苯丙酸处理过的RAW264.7巨噬细胞的上清液一起孵育24 H。用细胞培养显微镜捕获图像，并使用ImageJ软件评估划痕区域，以确定迁移率。在与10μmol/ L 艾曲波帕（或DMSO）孵育24小时后，收集RAW264.7细胞的上清液。还使用刮擦测定法分析了HUVEC的迁移能力，该迁移能力直接受到10μmol/ L 艾曲波帕的影响。

　　由于RRM12是HuR蛋白的主要ARE结合域，因此我们进一步表达和纯化了RRM12蛋白。我们首先通过EMSA确认了RRM12和ARE Vegf-a序列的结合活性和500 nmol / L优化的RRM12蛋白用于FP检测。艾曲波帕破坏RRM12-ARE Vegf-a相互作用的IC50值是使用FP测定至2.9μmol/ L，类似于HuR-AREVegf-a的相互作用，并指出RRM12可能包含艾曲波帕作用的位点。因此，我们然后使用AutoDock4.2.6模拟了艾曲波帕和RRM12的交互模式。艾曲波帕分子可以通过氢键相互作用与由两个RRM结构域形成的带正电荷的裂缝结合，这也是富U RNA的结合位置。我们还通过SPR分析检测了艾曲波帕与RRM12蛋白之间的相互作用。结果表明艾曲波帕能够以2.5μmol/ L的KD值与RRM12蛋白结合。这些数据表明艾曲波帕可以通过靶向HuR RRM12结构域来阻止HuR与RNA的结合。

　　艾曲波帕破坏了HuR RRM12与ARE Vegf-a之间的相互作用。确认EMSA中DHTS-1对RRM12-ARE Vegf-a的相互作用和破坏。使用FP方法的不同浓度的RRM12蛋白和20nmol / L FAM标记的AREVegf-a的结合测定。艾曲波帕对RRM12蛋白与ARE Vegf-a相互作用的影响的基于FP的IC50分析。艾曲波帕与RRM12结合的计算机模拟。艾曲波帕与RRM12蛋白结合的SPR分析。数据表示为平均值±SD，n=3。

　　我们首先检测了艾曲波帕对五种癌细胞系和一种巨噬细胞系的细胞毒性：4T1，A549，H1299，LLC，SMMC7721和RAW264.7。阿曲莫帕可抑制所有检测到的细胞系的体外细胞活力。由于艾曲波帕对4T1细胞最有效，因此我们选择了4T1细胞进行进一步的体内抗肿瘤和机理分析。巨噬细胞是肿瘤进展，尤其是肿瘤血管生成的关键驱动力，因此下面还将讨论巨噬细胞介导的艾曲波帕的抗肿瘤机制。现在还是非常建议购买艾曲波帕的，更多详情可咨询下方微信。