评价达克替尼Dacomitinib的抗癌作用

　　背景:　　

　　atp结合盒亚家族G成员2 (ABCG2)是ABC转运子超家族蛋白的成员之一，通过将抗癌药物转运出癌细胞，减少其在细胞内的积累，介导多药耐药(MDR)。耐多药是成功化疗的主要障碍。克服MDR的一个合理方法是抑制转运蛋白。然而，目前还没有安全有效的MDR抑制剂被批准用于临床。　　

　　方法:　　

　　MTT法检测细胞毒性和MDR逆转作用。采用流式细胞术检测药物流出量和细胞内药物积累。建立H460/MX20细胞异种移植模型，在体内评价达克替尼增强拓替康的抗癌作用。　　

　　为了确定达克替尼与ABCG2底物结合位点的相互作用，我们进行了达克替尼与[125I]-碘酰拉唑嗪(IAAP)对光标记ABCG2的竞争。在不同浓度的达克替尼的存在下，测定了ABCG2的钒酸敏感ATP酶活性，以评估达克替尼对ATP水解作为转运蛋白能量来源的影响。采用流式细胞术和western blotting研究达克替尼是否能抑制ABCG2的表达水平。实时定量RT-PCR检测ABCG2 mRNA表达水平。Western blotting检测AKT、ERK蛋白表达水平及其磷酸化水平。　　

　　结果:　　

　　在本研究中，我们发现不可逆的泛erbb酪氨酸激酶抑制剂(pan-ErbB tyrosine kinase inhibitor, TKI)达克替尼(dacomitinib)可以特异性地增强常规化疗药物对过表达abcg2的MDR癌细胞的疗效，但对亲本敏感细胞则无此作用。研究发现，达克替尼通过抑制转运体外泄功能，显著增加了ABCG2探测底物的积累。　　

　　此外，达克替尼可刺激ABCG2 atp酶活性，并以浓度依赖的方式与[125I]-IAAP光标记ABCG2竞争。然而，达克替尼并没有在蛋白和mRNA水平上改变ABCG2的表达，也没有抑制AKT和ERK的ErbB下游信号。重要的是，达克替尼显著增强了topotecan对过表达abcg2的H460/MX20裸鼠异种移植细胞的疗效，而不会产生额外的毒性。　　

　　结论:　　

　　这些结果表明，达克替尼(Dacomitinib)通过抑制ABCG2的外排功能和增加抗癌药物的细胞内积累来逆转ABCG2介导的MDR。我们的研究结果提倡在abcg2过表达的MDR肿瘤患者中进一步临床研究达克替尼联合常规化疗。详情请扫码咨询：